Adenowirusy

POGLĄD: Co każdy klinicysta musi wiedzieć

Adenowirus jest dwuniciowym wirusem DNA z rodziny Adenoviridae.

Człowiecze adenowirusy są podzielone na sześć gatunków (A-F). Poszczególne serotypy oznaczane są numerycznie (np. Ad5, Ad7). Zespoły kliniczne są związane z określonymi serotypami, chociaż istnieje duża zmienność geograficzna i czasowa szczepów powodująca powstawanie ognisk zakażeń adenowirusowych.

Jakie jest najlepsze leczenie?

Nie ma zatwierdzonych przez FDA środków do leczenia zakażeń adenowirusowych. Najskuteczniejszym, dostępnym klinicznie środkiem przeciwwirusowym aktywnym wobec adenowirusów jest cydofowir. Cydofowir jest również lekiem, z którym wiąże się najwięcej opublikowanych doświadczeń w leczeniu ciężkich zakażeń u pacjentów z obniżoną odpornością. Rola terapii przeciwwirusowej w zakażeniach adenowirusowych zależy w dużej mierze od sytuacji klinicznej. Istnieje kilka szerokich kategorii zakażeń adenowirusowych, które można zdefiniować jako dotyczące głównie określonych układów narządowych (tj. choroby układu oddechowego, choroby oczu, choroby przewodu pokarmowego, choroby układu moczowo-płciowego, choroby ośrodkowego układu nerwowego oraz choroby u pacjentów z obniżoną odpornością.

Cydofowir, acykliczny analog nukleozydu, hamuje adenowirusową polimerazę DNA i powoduje zakończenie syntezy DNA. Główną toksycznością cydofowiru jest nefrotoksyczność. Nie ma randomizowanych, kontrolowanych badań nad skutecznością cydofowiru w leczeniu zakażeń adenowirusowych. Istnieją jednak liczne opisy przypadków i serie przypadków pacjentów z immunosupresją, u których leczenie cydofowirem zakończyło się powodzeniem. Specyficzne układy narządów, w których często dochodzi do zakażenia adenowirusem u pacjentów w immunosupresji, obejmują układ oddechowy, wątrobowy i moczowy. Może również wystąpić zapalenie jelita grubego i zajęcie oczu. Leczenie cydofowirem w dawce 5mg/kg podawanej raz w tygodniu jest zalecaną dawką w przypadku choroby inwazyjnej i rozsianej, chociaż często występuje toksyczność ograniczająca dawkę u pacjentów otrzymujących wiele leków nefrotoksycznych. Nefrotoksyczność leczenia cydofowirem może być złagodzona przez odpowiednie nawodnienie i jednoczesne podawanie probenecydu, chociaż istnieją ograniczone dane na temat ochronnego działania probenecydu. W niektórych z tych badań stosowano również rybawirynę w skojarzeniu lub jako środek profilaktyczny przed rozwojem jawnego zakażenia adenowirusowego.

Podstawowymi czynnikami ryzyka rozwoju przetrwałej wiremii adenowirusowej i choroby inwazyjnej są mała liczba limfocytów T i leczenie lub protokoły, które bezpośrednio obniżają liczbę limfocytów T, w tym globulina antytymocytarna, przeszczepy pozbawione komórek T, alemtuzumab i długotrwała immunosupresja. Utrzymujący się i wzrastający poziom adenowirusów we krwi obwodowej jest skorelowany ze zwiększonym ryzykiem wystąpienia choroby inwazyjnej i śmiertelności. U pacjentów z wysokim ryzykiem wystąpienia choroby adenowirusowej zalecane są strategie prewencyjne. Poziom adenowirusów jest monitorowany co tydzień we krwi obwodowej za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR), a terapia wyprzedzająca z zastosowaniem cydofowiru jest wprowadzana, gdy poziom wiremii przekracza zdefiniowane wcześniej poziomy odcięcia. Poziom, na którym należy zastosować empiryczną terapię wyprzedzającą nie jest jednoznaczny, ponieważ na ryzyko wystąpienia choroby inwazyjnej duży wpływ mają towarzyszące czynniki ryzyka. U pacjentów z najwyższym ryzykiem, poziom adenowirusów tak niski jak 100 kopii/ml był używany jako wartość progowa dla leczenia wyprzedzającego, podczas gdy 10,000 kopii/ml było używane jako wartość odcięcia u pacjentów z niższym ryzykiem. Należy zauważyć, że obecność krążącego adenowirusowego DNA może występować u osób zdrowych, aczkolwiek rzadziej i na niższych poziomach.

Decyzje dotyczące leczenia wyprzedzającego cydofowirem w tej sytuacji są podobne do decyzji dotyczących leczenia CMV u biorców przeszczepów, u których szybko rosnąca wiremia jest skorelowana ze zwiększonym ryzykiem choroby, ale decyzja o rozpoczęciu leczenia opiera się na czynnikach ryzyka gospodarza, jak również na bezwzględnej wiremii. Ponadto, ekstrapolacja wyników na podstawie wiremii pomiędzy instytucjami jest trudna ze względu na różnice w metodologii badań i czułości pomiędzy laboratoriami. Walidacja charakterystyki wydajności testu PCR i korelacja z wynikami specyficznymi dla instytucji jest zatem krytyczna w decyzjach terapeutycznych opartych na pomiarach PCR adenowirusa.

Niższa dawka cydofowiru (1 mg/kg) trzy razy w tygodniu została zalecona w celu ograniczenia nefrotoksyczności, szczególnie gdy jest podawana jako terapia wyprzedzająca oparta na samej wiremii przy braku objawów choroby. Z powodzeniem stosowaliśmy ten niższy schemat dawkowania z akceptowalną toksycznością i supresją wiremii w warunkach HSCT (obserwacje niepublikowane). Długość terapii, zarówno w przypadku leczenia zapobiegawczego, jak i w przypadku aktywnej choroby, pozostaje nieokreślona. Jest jednak jasne, że pacjent pozostaje w grupie znacznego ryzyka do czasu odbudowy liczby limfocytów T, a zwłaszcza odporności komórkowej swoistej dla adenowirusa. Dlatego zmniejszenie jatrogennej immunosupresji, na ile jest to możliwe, jest krytycznym aspektem skutecznego leczenia zakażenia adenowirusowego u pacjentów z immunosupresją. Należy zauważyć, że chociaż cydofowir wykazuje aktywność wobec wielu wirusów opryszczki i jest stosowany jako terapia ratunkowa w leczeniu zakażenia CMV, niższy schemat dawkowania 1 mg/kg trzy razy w tygodniu w przypadku adenowirusa może być niewystarczający do leczenia lub zapobiegania reaktywacji CMV lub choroby u pacjenta z immunosupresją. W ten sposób choroba CMV rozwinęła się u pacjentów leczonych adenowirusem za pomocą schematu cydofowiru podawanego trzy razy w tygodniu.

Chociaż miejscowo stosowany cydofowir był skuteczny w zwierzęcych modelach adenowirusowej choroby oczu, toksyczność w badaniach na ludziach doprowadziła do porzucenia jego rozwoju w leczeniu zapalenia spojówek. Jak wspomniano, chociaż rybawiryna była stosowana w leczeniu infekcji adenowirusowych, jej sukces kliniczny był zmienny. Ponadto rybawiryna jest nieaktywna wobec kilku serotypów adenowirusów i dlatego jej stosowanie nie jest ogólnie zalecane w zakażeniach adenowirusowych.

W modelach zwierzęcych udokumentowano rozwój oporności na cydofowir, ale nie wykazano jej związku z klinicznym niepowodzeniem leczenia. Jak opisano wcześniej, głównym czynnikiem decydującym o powodzeniu leczenia jest odzyskanie funkcji układu odpornościowego, a rolą cydofowiru jest hamowanie replikacji adenowirusów do czasu rekonstytucji układu odpornościowego.

Badanie izolatów adenowirusów pod kątem oporności na leki nie jest rutynowo wykonywane.

Terapie alternatywne koncentrują się na dostarczaniu limfocytów T o aktywności skierowanej przeciwko adenowirusom. Takie terapie mogą być szeroko skategoryzowane jako zatrudniające nieselekcjonowane limfocyty dawcy, populacje limfocytów dawcy selektywnie wzbogacone o aktywność przeciwko adenowirusowi lub cytotoksyczne limfocyty T generowane przez stymulację epitopami adenowirusowymi ex vivo. Chociaż infuzje limfocytów dawcy były podobno skuteczne w opornych przypadkach infekcji adenowirusowej, towarzyszące powikłania choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD) ograniczyły ich użyteczność. Wykazano, że limfocyty T specyficzne dla adenowirusa, uzyskane po stymulacji in vitro adenowirusem i wyselekcjonowane na podstawie wydzielania cytokin, zmniejszają ładunek adenowirusa we krwi. Alternatywne podejście, które z powodzeniem stosowano w leczeniu choroby limfoproliferacyjnej związanej z EBV, zostało ostatnio rozszerzone o leczenie zakażeń adenowirusowych u pacjentów po HSCT. Linie cytotoksycznych limfocytów T (CTL) są generowane i ekspandowane in vitro poprzez inkubację z komórkami transdukowanymi adenowirusem lub komórkami, w których białka adenowirusowe uległy ekspresji poprzez transfekcję. Infuzja tych linii CTL doprowadziła do redukcji ładunków adenowirusowych u kilku pacjentów i skutecznego leczenia opornej choroby. Ograniczenia związane z kosztami, pracą i czasem potrzebnym do wytworzenia indywidualnych linii CTL dla poszczególnych pacjentów ograniczają dostępność takich terapii do wysoko wyspecjalizowanych ośrodków badawczych. Jednak postęp technologiczny zmniejsza się, takie bariery do bardziej ogólnej dostępności takich metod leczenia.

Sprzężona z lipidami forma cydofowiru (heksadecyloksypropyl cydofowir) jest obecnie w trakcie badań klinicznych dla różnych infekcji wirusowych, w tym adenowirusów. Zdolność koniugatu lipidowego do szybkiej translokacji komórkowej w jelitach i do komórek docelowych przed rozszczepieniem do aktywnej postaci leku pozwala na podawanie doustne i może ograniczać nefrotoksyczność.

Jak pacjenci zarażają się tym zakażeniem i jak zapobiegać rozprzestrzenianiu się zakażenia na innych pacjentów?

Epidemiologia

Epidemiologia zakażeń adenowirusowych w dużym stopniu zależy od wieku badanych populacji. Określone serotypy dotyczą przede wszystkim dzieci, natomiast dorośli pozostają bardziej podatni na inne, odmienne serotypy. Adenowirusy są wydalane w stolcu przez dłuższy czas, szczególnie u dzieci, które mogą wydalać wirusa bezobjawowo przez wiele miesięcy. Infekcja adenowirusowa może przebiegać bezobjawowo, co komplikuje przypisanie specyficznych zespołów klinicznych do izolatów wirusowych. Jednakże, określone serotypy (np. 40 i 41) są związane z ogniskami choroby biegunkowej, które są przenoszone drogą fekalno-oralną. Epidemie chorób układu oddechowego związanych z adenowirusami, głównie zapalenia płuc, są od dawna rozpoznawane u rekrutów wojskowych. Epizody takie występują zwykle wraz z nadejściem zimnej pogody i głównie u osób bez wcześniejszego narażenia, stąd wysoka częstość występowania u nowych rekrutów. Ponadto, ograniczenie takich epidemii do warunków typu koszarowego sugeruje, że bliski kontakt oraz prawdopodobnie stres i zmęczenie przyczyniają się do skutecznego przenoszenia. Choroba układu oddechowego występuje głównie poprzez przenoszenie drogą kropelkową zakaźnych wydzielin.

Zapalenie spojówek może rozprzestrzeniać się z osoby na osobę lub przez przedmioty, a także było związane z kontaktem ze skażoną wodą, np. w basenach. Epidemiczne zapalenie rogówki i spojówek jest odrębną jednostką, która jest wysoce zaraźliwa i jest związana ze specyficznymi serotypami, takimi jak Ad37.

Zakażenia Adenowirusami występują na całym świecie i są wszechobecne we wszystkich populacjach, chociaż przenoszenie jest wzmocnione przez warunki niskiej higieny i przeludnienia. Krwotoczne zapalenie pęcherza moczowego występuje częściej u mężczyzn.

Zachorowalność na adenowirusowe zakażenia układu oddechowego w populacjach wojskowych wzrosła w okresach, w których rekruci nie byli już szczepieni. Ogólna częstość występowania zakażeń adenowirusowych w populacji ogólnej nie uległa żadnym wyraźnym zmianom; jednak na całym świecie występują skupiska ognisk wśród dzieci.

Kwestie kontroli zakażeń

W celu zapobiegania szpitalnemu przenoszeniu adenowirusów należy stosować środki ostrożności polegające na zakraplaniu oraz ścisłą higienę rąk.

Szczepionka przeciwko serotypom 7 i 4 była ogólnie dostępna dla wojska do czasu zaprzestania produkcji w 1999 roku. Szczepionka ta została ostatnio ponownie zatwierdzona do stosowania w populacjach wojskowych w wieku od 17 do 50 lat. Szczepionka jest preparatem doustnym zawierającym żywe adenowirusy. Dwie tabletki, jedna zawierająca Ad4, a druga Ad7, są podawane jako pojedyncza dawka. Powłoka powoduje zakażenie przewodu jelitowego z pominięciem układu oddechowego i prowadzi do serokonwersji. Szczepionka nie jest atenuowana, dlatego szczepy szczepionkowe adenowirusów są wydalane z kałem przez okres do 28 dni po podaniu. Szczepionka nie jest dopuszczona do stosowania u kobiet w ciąży. Jednak w trakcie badań terenowych szczepionki doszło do czterech ciąż i u żadnej z kobiet ani dzieci nie wystąpiły żadne działania niepożądane po podaniu szczepionki. Szczepionka przeciw adenowirusom nie jest obecnie dostępna do użytku cywilnego.

Główne mechanizmy ochronne przed zakażeniem adenowirusami są pośredniczone przez komórki. Zarówno limfocyty T CD4+ jak i CD8+ specyficzne dla epitopów adenowirusowych są możliwe do wykazania u ludzi. Limfopenia CD4+ T jest głównym czynnikiem ryzyka inwazyjnej infekcji u gospodarza z obniżoną odpornością, a powrót limfocytów CD4+ T koreluje z wyzdrowieniem z infekcji. Wrodzona odpowiedź immunologiczna jest wyraźnie wywoływana przez adenowirusy, a wydzielanie interferonu jest indukowane przez infekcję adenowirusową. Kilka genów adenowirusów moduluje odpowiedź immunologiczną gospodarza poprzez różne mechanizmy. Białko E1A hamuje transdukcję sygnału IFN. Adenowirusowe VA RNA, małe niekodujące RNA blokują wyłączenie translacji u gospodarza, które normalnie występuje jako odpowiedź na infekcję wirusową. Białka E3 zakłócają prezentację antygenów gospodarza, uwalnianie chemokin i apoptozę zakażonych komórek. Zgodnie z funkcją tych genów adenowirusowych, najsilniejsze odpowiedzi zapalne są często obserwowane u pacjentów lub u zwierząt zakażonych wektorami adenowirusowymi, w których usunięto geny adenowirusowe o funkcji immunodulacyjnej.

Klinicznie, głównymi czynnikami ryzyka zakażenia są różne rodzaje immunosupresji. Chociaż wszyscy pacjenci z wrodzonymi i nabytymi formami niedoboru odporności są narażeni na zwiększone ryzyko, specyficzne warunki wydają się być silniejszymi czynnikami ryzyka. Wśród pacjentów po HSCT, przeszczepy od dopasowanego dawcy niespokrewnionego i leczenie immunosupresyjne, takie jak globulina antytymocytarna (ATG) i alemtuzumab, wiążą się ze zwiększonym ryzykiem. Choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi jest związana z rozsianą infekcją adenowirusową, ale nie jest jasne, czy GVHD rzeczywiście predysponuje do choroby adenowirusowej. Czynniki ryzyka dla choroby adenowirusowej w przeszczepach narządów litych (SOT) obejmują przeszczepy pediatryczne, terapię globuliną antylimfocytarną, przeszczepy wątroby i jelita cienkiego oraz serologię adenowirusową dodatnią u dawcy i ujemną u biorcy.

We wczesnym stadium zakażenia obecne są eozynofilowe wtręty jądrowe z charakterystycznym wyraźnym halo. Komórki smugowe są charakterystycznym znaleziskiem komórek w późnym stadium zakażenia. W komórkach rozmazanych błona jądrowa jest niewyraźna, a jądro jest prawie całkowicie zajęte przez dużą okrągłą lub owalną inkluzję bazofilową.

Jakie są objawy kliniczne zakażenia tym drobnoustrojem?

Choroba układu oddechowego u dzieci: Adenowirusowa choroba układu oddechowego składa się z szerokiego spektrum objawów klinicznych, od łagodnej choroby górnych dróg oddechowych do prawdziwego zapalenia płuc. Objawom oddechowym może towarzyszyć zapalenie gardła i powiększenie węzłów chłonnych. Chociaż na ogół przebieg choroby jest łagodny, opisywano przypadki zapalenia płuc z wysoką śmiertelnością u dzieci. W niektórych seriach hospitalizowanych dzieci z udokumentowanym zakażeniem adenowirusowym obserwowano wysoką gorączkę, leukocytozę i wysiękowe zapalenie gardła przypominające zakażenie bakteryjne. Ad3 i rekombinowane szczepy były związane z ciężkimi ogniskami adenowirusowego zakażenia dróg oddechowych z przypadkami śmiertelnymi u małych dzieci. Gorączka gardłowo-spojówkowa jest zespołem charakteryzującym się zapaleniem spojówek, gardła, gorączką oraz powiększeniem węzłów chłonnych przedusznych i szyjnych. Objawy ze strony układu oddechowego mogą być nieobecne, a zakażenie może przebiegać jako izolowane zapalenie spojówek. Ostra choroba układu oddechowego (ARD) w skupiskach: ARD również składa się ze spektrum chorób, począwszy od stosunkowo łagodnej choroby górnych dróg oddechowych, a skończywszy na prawdziwym zapaleniu płuc. Objawy podczas wybuchów epidemii wśród rekrutów wojskowych wahały się od zapalenia gardła, kaszlu i gorączki do zapalenia oskrzeli i zapalenia płuc. Ad4, Ad7, i Ad14 były najczęściej związane z ogniskami wśród rekrutów wojskowych. Ciężkość choroby w tym środowisku może być znaczna, prowadząc do hospitalizacji ponad 40% pacjentów z objawami.

Choroby oczu

Ostre zapalenie spojówek: Adenowirusowe zapalenie spojówek objawia się jako jednostronne lub, częściej, obustronne pęcherzykowe zapalenie spojówek. Do przeniesienia może dojść w wyniku kontaktu i kontaktu z innymi osobami lub w wyniku narażenia na kontakt ze źródłami wody, takimi jak baseny lub stawy słodkowodne. Choroba jest na ogół łagodna i samoograniczająca się, ustępuje w ciągu mniej niż 7 dni bez następstw. Zapalenie spojówek jest najczęściej związane z Ad3 i Ad7.

Epidemiczne zapalenie rogówki i spojówek (EKC): Zespół EKC jest klinicznie odmienny od łagodnego adenowirusowego zapalenia spojówek występującego u dzieci. EKC charakteryzuje się bardziej nasilonymi objawami, w tym bólem, łzawieniem i światłowstrętem. Zajęcie spojówek jest często jednostronne, ale może rozprzestrzeniać się na oboje oczu. Zapalenie może być rozległe, prowadząc do podrogówkowej nieprzezroczystości i bliznowacenia z upośledzeniem widzenia. EKC jest wysoce zakaźny i został powiązany z Ad8, Ad19, Ad37 i, rzadziej, innymi serotypami.

Choroby układu moczowo-płciowego: Krwotoczne zapalenie pęcherza moczowego wywołane przez adenowirusy charakteryzuje się grubym krwiomoczem przy braku innych możliwych do zidentyfikowania przyczyn oraz wykryciem adenowirusa w moczu i krwi. Krwotoczne zapalenie pęcherza moczowego występuje głównie u młodych mężczyzn, z nieznanych przyczyn. Krwotoczne zapalenie pęcherza moczowego jest związane z serotypami 11 i, w mniejszym stopniu, 21. Krwiomocz brutto utrzymuje się przez 2-5 dni, towarzyszy mu dysuria, ale jest samoograniczający i ustępuje bez następstw. Ciężkość i powikłania krwotocznego zapalenia pęcherza moczowego spowodowanego zakażeniem adenowirusowym u pacjentów z obniżoną odpornością są jednak znacznie większe.

Choroby przewodu pokarmowego: Ad40 i Ad41 są dominującymi szczepami, które zostały uznane za istotne przyczyny biegunki u niemowląt. Głównym objawem jest biegunka, która czasami może być długotrwała. Badania prospektywne wykazały, że znaczna liczba zakażeń występujących podczas epidemii może przebiegać bezobjawowo.

Zakażenia u pacjentów z obniżoną odpornością: Zakażenie adenowirusami stanowi szczególnie trudny problem u pacjentów po HSCT i SOT, zwłaszcza tych, u których występują dodatkowe czynniki ryzyka skutkujące upośledzeniem funkcji limfocytów T. Choroba adenowirusowa jest również bardziej prawdopodobna w populacji dziecięcej poddanej immunosupresji i wiąże się z większym ryzykiem zakażenia pierwotnego i reaktywacji. Zakażenie rozsiane może obejmować praktycznie każdy układ narządowy, powodując istotne klinicznie zapalenie wątroby, zapalenie płuc, krwotoczne zapalenie pęcherza moczowego lub zapalenie jelita grubego. Zakażenie w narządzie przeszczepionym jest szczególnie prawdopodobne u biorców SOT.

Choroby układu oddechowego: Adenowirusowe zapalenie płuc przebiega zwykle podobnie jak inne wirusowe zapalenia płuc z naciekami śródmiąższowymi. Kaszel jest na ogół nieproduktywny w przypadku braku superinfekcji bakteryjnej. Histopatologicznie wykazano, że adenowirusowe zapalenie płuc u biorcy przeszczepu płuc skutkuje martwicą oskrzeli, krwotokiem i naciekiem komórkowym. Wiele typów komórek (pneumocyty, makrofagi i komórki nabłonka oskrzeli) wykazało dowody infekcji adenowirusowej z charakterystycznymi inkluzjami jądrowymi (komórki smugowe). Adenowirusowe zapalenie jelita grubego może występować u osób dorosłych poddanych immunosupresji jako zapalne zapalenie żołądka i jelit ze złuszczaniem nabłonka i zakażeniem komórek zwojowych, z typowymi inkluzjami w rozproszonych komórkach.

Choroba wątroby: Adenowirusowe zapalenie wątroby ma najgorsze rokowanie u biorców przeszczepów wątroby, ale może również wystąpić u pacjentów po HSCT. Chociaż częściej występuje u pacjentów pediatrycznych, adenowirusowe zapalenie wątroby występuje również u dorosłych biorców przeszczepów wątroby i ma złe rokowanie. W adenowirusowym zapaleniu wątroby opisano schemat martwicy koagulacyjnej. Brak istotnego zapalenia może być bardziej charakterystyczny dla etiologii adenowirusowej niż GVHD lub odrzucenie.

Jak należy zidentyfikować organizm?

Próbki tkanek z zaatakowanego narządu są na ogół najbardziej przydatne. Wydzieliny z dróg oddechowych, wymazy z nosogardła są przydatne w diagnostyce infekcji dróg oddechowych i gardła. Skrawki lub wymazy ze spojówek mogą być badane w zapaleniu spojówek. Wykrywanie wirusa w kale może być przydatne w dochodzeniu epidemiologicznym, ale często jest pozytywne przez wiele miesięcy po ostrym zakażeniu z powodu bezobjawowego rozsiewu. U pacjentów z obniżoną odpornością, próbki biopsyjne mogą być bardzo przydatne w udokumentowaniu przyczyny zapalenia wątroby lub zapalenia jelita grubego, umożliwiając identyfikację wirusa lub diagnostyczne zmiany histopatologiczne w zakażonych komórkach. Próbki bronchoskopowe mogą być badane w przypadkach zapalenia płuc u pacjentów z obniżoną odpornością. Seryjne ilościowe oznaczanie wiremii adenowirusowej we krwi obwodowej metodą PCR jest niezwykle przydatne w monitorowaniu pacjentów wysokiego ryzyka z SOT i HSCT.

Adenowirusy mogą być wykrywane bezpośrednio z próbek układu oddechowego, oczu lub moczu poprzez utrwalanie komórek, barwienie przeciwciałami i badanie komórek mikroskopem fluorescencyjnym. Pomimo szybkości, bezpośrednie badanie antygenów jest generalnie mniej czułe (~60%) niż hodowla. Mikroskopia elektronowa ujawnia tablice wirionów w komórkach zakażonych adenowirusem, ale nie jest stosowana poza środowiskiem badawczym.

Adenowirusy mogą być hodowane przez inokulację na laboratoryjnie hodowanych ludzkich lub ksenogenicznych liniach komórkowych. Wzrost jest zazwyczaj optymalny na komórkach pochodzących od człowieka. Wzrost niektórych serotypów jest najlepszy na komórkach HEK 293, które są transformowane przez geny adenowirusowe, które mogą zapewnić funkcję pomocniczą dla infekującego wirusa. Wzrost jest potwierdzany przez barwienie na antygeny adenowirusowe.

• Adenowirusy mogą być hodowane na różnych ludzkich liniach komórkowych. Technika powłoki fiolki obejmuje barwienie zakażonych monowarstw komórkowych przeciwciałem specyficznym dla wirusa 48 godzin po zakażeniu.

• Efekt cytopatyczny (CPE) może być widoczny w ciągu 2 godzin, ale może trwać tygodnie, w zależności od wielkości inokulum i innych czynników. Zainfekowane komórki pęcznieją, zaokrąglają się, odrywają od płytki i ostatecznie ulegają lizie.

• Serotypowanie nie jest wykonywane rutynowo, ale może być wykonywane w badaniach naukowych. PCR i sekwencjonowanie mogą być również stosowane do dalszej charakterystyki i klasyfikacji genotypów adenowirusów.

• Cykl replikacyjny zachodzi w ciągu 24-36 godzin w warunkach in vitro, ale wykrycie kliniczne za pomocą konwencjonalnej hodowli może trwać kilka dni lub tygodni.

• Ogółem techniki hodowlane są bardzo czułe i stanowią tradycyjnie złoty standard w wykrywaniu adenowirusów. Jednak hodowle muszą być przechowywane przez dłuższy czas, aby osiągnąć pełną czułość.

Quantitative PCR jest obecnie komercyjnie dostępny do pomiaru obciążenia adenowirusami we krwi. Takie badania mogą być również wykonywane na innych płynach ustrojowych, ale standaryzacja takich badań jest problematyczna, a interpretacja wyników może być złożona. Zarówno czułość jak i swoistość są wysokie, gdy są wykonywane w doświadczonych laboratoriach. Techniki PCR są specyficzne dla sekwencji genomowych reprezentowanych w stosowanych starterach i dlatego mogą być ograniczone w zakresie szczepów, które są w stanie wykryć.

Testy ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) są dostępne i są szybkie, ale mniej czułe niż hodowla.

Jak ten organizm wywołuje choroby?

Opisano białka kodowane przez adenowirusy, które mogą być ważne w unikaniu odporności, ochronie zakażonych komórek przed apoptozą i zapobieganiu wyłączenia komórek gospodarza

Określono determinanty patogenezy preferencyjnej tkankowo wykazywanej przez różne szczepy (np. skłonność Ad 40/41 do wywoływania chorób układu pokarmowego) są niescharakteryzowane i mało prawdopodobne, aby opierały się na specyficznym tropizmie komórkowym, ponieważ nie wiadomo, czy receptory dla adenowirusów są wysoce specyficzne dla danego typu komórek.

JAKIE SĄ DOWODY na określone zalecenia dotyczące postępowania i leczenia?

Berk, A, Knipe, DM, Howley, PM. „Adenoviridae: wirusy i ich replikacja”. Fields virology. vol. 2. 2007. pp. 2355-94. (Wyczerpujący przegląd wirusologii, epidemiologii i patologii zakażeń adenowirusami u pacjentów immunokompetentnych i z obniżoną odpornością.)

Leen, AM, Christin, A, Myers, GD. „Cytotoxic T lymphocyte therapy with donor T cells prevents and treats adenovirus and Epstein-Barr virus infections after haploidentical and matched unrelated stem cell transplantation”. Blood. vol. 114. 2009. pp. 4283-92. (Opis nowej alternatywnej terapii cytotoksycznymi komórkami T skierowanej specjalnie przeciwko adenowirusom i innym zakażeniom wirusowym u biorców przeszczepów.)

Lindemans, CA, Leen, AM, Boelens, JJ. „How I treat adenovirus in hematopoietic stem cell transplant recipients”. Blood. vol. 116. 2010. pp. 5476-85. (Wyczerpujące omówienie strategii stratyfikacji ryzyka zakażenia adenowirusem oraz algorytmów terapeutycznych dla pacjentów HSCT wysokiego ryzyka.)

Wold, W, Horwitz, M, Knipe, DM, Howley, PM. „Adenowirusy”. Fields virology. vol. 2. 2007. pp. 2395-436. (Kompleksowy przegląd wirusologii, epidemiologii i patologii zakażeń adenowirusami u pacjentów z prawidłową odpornością i z obniżoną odpornością.)

.