A gyulladásos folyamatok modulációja homeopátiás Arnica montana 6CH által: az egyéni variáció szerepe

Abstract

Az Arnica montana 6cH hatását vizsgálták az akut gyulladás kinetikájának egyéni modulációjára patkányokban. Felnőtt hím Wistar patkányokat 1%-os karragénnel oltottak be a talpbőrbe, majd Arnica montana 6cH-val, dexametazon (4,0 mg/kg; pozitív kontroll) vagy 5%-os hidroalkoholos oldattal (negatív kontroll) kezelték őket per os, 15 percenként, 30 és 180 perccel az irritáló inokuláció után. Hisztopatológiai és immunhisztokémiai eljárásokat végeztünk a CD3 (T-limfociták), CD45RA (B-limfociták), CD18 (béta-2 integrin), CD163 (ED2 fehérje), CD54 (ICAM-1) és MAC 387 (monociták és makrofágok) gyulladásos pozitív sejtek panelének kinyerése érdekében. Az adatok statisztikai kezelése magában foglalta az egyes csoportok () állatainak utólagos besorolását két alcsoportba, amelyek spontán korai vagy késői ödémát mutattak. A korai ödémát bemutató állatok kevésbé voltak felelősek az Arnica montana 6cH-ra a hemodinamikai változások tekintetében. Ehelyett a késői ödémát mutató patkányok kevésbé intenzív ödémát (), a hízósejtek degranulációjának alacsonyabb százalékát () és a nyirokerek átmérőjének növekedését () mutatták. Az adatok a gyulladásos érrendszeri események Arnica montana 6cH általi egyedi minőségi beállítására utalnak.

1. Bevezetés

A homeopátiás gyógyszerek hatékonyságával kapcsolatos egyik legtöbbet vitatott ellentmondás a beteg és a gyógyszer patogenezise közötti tökéletes tüneti analógia azonosításának szükségessége, vagyis a similia elv szerinti egyéni felírás szükségessége. Ez a sajátosság a terület tudományos kutatásának egyik legnehezebb kihívása, mivel kísérleti bizonyítása technikailag igen nehéz. Valóban, kevés kísérleti tanulmányt találunk erről a szakirodalomban. Így e sajátosság kísérleti bizonyítása és mechanizmusainak megértése hasznos eszköz lehet a homeopátia hatékonyságával kapcsolatos, a klinikai vizsgálatok során gyakran tapasztalt krónikus viták megoldásához. A közelmúltban egy elegáns in vitro vizsgálat bizonyította a szabályozó és adaptív sejtmechanizmusok fontosságát a rákos sejtekre citotoxikus hatást kiváltó homeopátiás szerek nagyságrendjében .

1997-től 2008-ig lépésről lépésre haladva állatkísérleteket végeztünk a homeopátiás Arnica montana, különösen az Arnica montana 6cH biológiai hatásairól, állatmodellek felhasználásával . Röviden, az ezekben a vizsgálatokban kapott eredmények azt mutatják, hogy az Arnica montana 6cH képes modulálni az akut gyulladásos folyamatot patkányokban, mivel képes növelni a nyirok ödéma felszívódását és a helyi véráramlást, valamint elősegíteni a polimorfonukleáris sejtek vándorlásának tömbjét. Mindezen kísérleteket időrendben a .

Az Arnica montana a Compositae családba tartozó növény, amely Kelet- és Közép-Európa dombvidékein nő. Leveleiben, virágaiban és gyökereiben számos aktív vegyületet azonosítottak, mint például alkoholokat, tannint, flavonoidokat és szeszkiverterpén laktonokat, különösen helenalint . A helenalin fő hatása az NFκβ transzkripciós faktor gátlása, hasonlóan a kortikoid szteroidokhoz . A növény véletlenszerű lenyelése értágulatot, vér pangást, vérzést, ödémát és fájdalmat okozhat. Ezek a hatások a fő témák, amelyeket az Arnica montana materia medica leír . Emiatt a traumás fájdalom és az ödéma felszívódása a fő indikáció az Arnica montana homeopátiás készítményeinek klinikai és kísérleti használatára . A közelmúltban a nagy hígítású Arnica montana más felhasználási módjai is felmerültek, mint például az Arnica 3, 6 és 12cH potenciákban történő agronómiai felhasználása a növények növekedésének javítására .

A jelen tanulmány célja két hipotézis ellenőrzése volt: (a) a vaszkuláris és sejtes események feltételezett modulációja az akut gyulladásban az Arnica által, a gyulladásos helyen jelen lévő neutrofilek, monociták, T- és B-limfociták arányára és a gyulladt kötőszövetben az adhéziós molekulák expressziójának intenzitására összpontosítva, immunhisztokémiai és hisztomorfometriai technikákkal; (b) a gyulladás kinetikájának természetes egyéni variációinak kimeneteire gyakorolt feltételezett beavatkozás.

2. Anyag és módszerek

2.1. A gyulladásos gyulladásos folyamatok és a gyulladáscsökkentő módszerek. Állatok

Felnőtt, 250 és 300 g közötti súlyú hím Wistar patkányokat használtunk. A patkányokat hagyományos laboratóriumi polipropilén ketrecekben tartották (ketrecenként 5-7 állatot), szabályozott hőmérsékleten (25 ± 3°C) és fényciklusban (reggel 6:00 órától este 6:00 óráig világítottak). A vizet és a táplálékot ad libitum kínálták. A kísérlet megkezdése előtt az állatokat véletlenszerűen megmértük, szétválasztottuk és három, egyenként 20 patkányból álló csoportba soroltuk.

2.2. Az állatokat véletlenszerűen megmértük, szétválasztottuk és azonosítottuk. Az akut gyulladás kiváltása

Az akut gyulladásos folyamatot 1%-os kappa karragén (SIGMA) steril sóoldatban hígított 1%-os kappa karragenán (SIGMA) szubkután beoltásával idéztük elő a talppárnába, amelynek vastagságát előzőleg mikrométerrel (MYTUTOYO) mértük.

30 és 180 perc után újabb méréseket végeztünk, hogy a kezelés előtti és utáni ödéma alakulását az idő függvényében értékeljük. Így az első 30 percben a spontán ödémaképződést, a fennmaradó 150 percben pedig a gyógyszerhatást mértük, mivel a kezelésekre a 30 perces mérés után került sor. A 180 perc elteltével az állatokat mély altatásban nyaki húzással elaltattuk, a talppárnákat pedig kivettük, és pufferelt 10%-os formaldehidben 24 órán keresztül – legfeljebb – rögzítettük, mielőtt hagyományos szövettani módszerekkel, többek között paraffinbeágyazással, hematoxilin-eozin és toluidinkék festéssel dolgoztuk fel őket. Ugyanezeket a paraffinblokkokat használtuk az immunhisztokémiai eljárások elvégzéséhez. Minden egyes lábtömbből egyetlen tárgylemezt készítettünk.

2.3. Csoportok és kezelések

Minden patkánycsoportot egy adott anyaggal kezeltünk az 1. táblázat szerint. Az Arnica montana 6cH-val kezelt patkányokat (kísérleti) és az ugyanattól a szállítótól kapott 5%-os hidroalkoholos oldattal nem kezelt patkányokat (negatív kontroll) kódokkal azonosítottuk, oly módon, hogy minden kezelés és mérés vakon történt. Ezeket a kódokat egy, a vizsgálatban részt nem vevő laboratóriumi technikus hozta létre, és egy lepecsételt lapon őrizték a statisztikai elemzésig, amikor is felfedték őket.

A dexametazonnal kezelt patkányok (pozitív kontroll) nyíltan készültek, az alkalmazott készítmény fizikai tulajdonságai miatt; teljesen különbözött a homeopátiás készítményektől, így könnyen felismerhető volt. A kezelést és a minták mikroszkópos elemzését két független személy végezte, mindig vakon. A gyulladáscsökkentő hatás kiváltására használt dexametazon teljes dózisa 4 mg/kg volt, a korábban meghatározott szabványoknak megfelelően. Ezt a frakcionált protokollt úgy tervezték, hogy reprodukálja az akut gyulladás kezelésének szokásos homeopátiás klinikai állapotát, és a csoportunk által végzett korábbi vizsgálatokban is használták . Pozitív kontrollcsoportként a dexametazonra esett a választás, mivel annak hatásmechanizmusa utánozza az Arnica montana fő hatóanyagának, a helenalinnak a mechanizmusát .

A kereskedelmi forgalomban kapható Arnica montana 6cH-t 5%-os hidroalkoholos oldatban állították elő a Brazil Nemzeti Egészségügyi Ellenőrző Ügynökség (ANVISA) által hitelesített gyógyszertárban, Farmácia Sensitiva, São Paulo. Az elkészítés során alkalmazott technikák a Brazilian Homeopathic Pharmacopea, 2. kiadás, 1997.

2.4. szerint történtek. Adatelemzés

A kezelést megelőző időszakban (nullától 30 percig) kapott ödéma intenzitásának első ábrázolása után az adatokat félholdas sorrendbe soroltuk egy Excel 2003 szoftver segítségével, oly módon, hogy minden csoportban fel lehetett osztani a 10 patkányt (50%), amelyek spontán alacsonyabb ödéma intenzitást mutattak, és a 10 patkányt (50%), amelyek magasabb ödéma intenzitást mutattak. Így minden egyes kísérleti csoportban két 10 állatból álló alcsoportot alakítottunk ki, amelyek a gyulladásos kinetikai mintázat szerint két különböző patkány alpopulációt jellemeztek (2. táblázat). A teljes kísérleti tervet egy folyamatábra magyarázza (7. ábra).

Mivel a karragén által kiváltott ödéma klasszikus görbéje az inokulációt követő 6 órán át tart, a két időpont (30 és 180 perc) kiválasztása annak ismert platóján alapult . Ráadásul az Arnica 6cH karragén indukálta ödémára gyakorolt hatásáról szóló korábbi tanulmányok nem mutatnak több hatást ezen időszak után . A gyulladásos folyamat értékelésének kinetikája a karragén beadása után egy klasszikus kísérleti modell, amelyet a 70-es években fejlesztettek ki . Így ez egy megbízható kritérium, amelyet ebben az esetben alkalmazni kell.

Az adatok ábrázolása után (1(a) és 1(b) ábra) mindkét kinetikai minta könnyen azonosíthatóvá vált: (a) azoknál az állatoknál, amelyeknél a kezelés előtti első 30 percben kevésbé intenzív ödéma jelentkezett, a csúcs 30 és 180 perc között volt (késői ödémának nevezték), és (b) azoknál, amelyeknél az első 30 percben intenzívebb ödéma jelentkezett, ezután csökkent (korai ödémának nevezték).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

1. ábra

Ödéma (mm) a különböző csoportokban és alcsoportokban. (a) Az ödéma alakulása az idő függvényében a korai ödéma alcsoportban; (b) az ödéma alakulása az idő függvényében a késői ödéma alcsoportban; (c) az ödéma intenzitása a kísérlet végén a korai ödéma alcsoportban; (d) az ödéma intenzitása a kísérlet végén a késői ödéma alcsoportban ; ANOVA, Tuckey-Krammer, a kontrollhoz viszonyítva. Az értékek átlagot ± standard eltérést jelentenek.

Az eredményeket a hat alcsoport között hasonlítottuk össze. Ezt az a posteriori kiválasztást azért végeztük, hogy a similia elvének megfelelően ellenőrizzük az egyéni idioszinkrázia szerepét az Arnica hatásában, mivel az ödéma remissziójának gyorsasága az egyik legismertebb, a materia medicában leírt Arnica montana tünet.

2.5. Az Arnica montana hatása. Immunhisztokémiai elemzés

Minden tárgylemezt 1 : 1 alkohol-éter oldattal mostunk öt percig, majd puha papírlapon megszárítottuk, és 1 : 10 poli-L-lizinnel (SIGMA) kezeltük. Ezután 5 mikronos paraffinba ágyazott szövetszeletek kerültek a felületükre 40 °C-os szövettani fürdő segítségével. Ezután a szeleteket két 2 perces abszolút xilolban és két 3 perces abszolút alkoholban történő fürdőn keresztül paraffinmentesítettük. A tárgylemezeket ezután folyó csapvízben mostuk.

Az immunhisztokémiai eljárásokhoz az antigén visszanyerésének első lépését a minták hőkezelésével végeztük. A tárgylemezeket citrát pufferfürdőbe (SIGMA) helyeztük, pH = 6,0, 0,5% tween 20 (DAKO) tartalommal, és egy elektromos edényben 80°C-on (PANASONIC) 20 percig melegítettük. Ezt követően a tárgylemezeket 6 percig PBS-ben, pH = 7,2 (SIGMA) mostuk, majd puha nedvszívó papírral szárítottuk, és a szövetmintát megfelelő tollal (Pap-pen, AbCam) határoltuk.

Az endogén peroxidáz aktivitást a szövetek metanolban hígított 3%-os H2O2 oldatban (ISOFAR), szobahőmérsékleten 15 percig történő inkubálásával blokkoltuk. Ezután 6 percig PBS-ben (SIGMA) mostuk őket, majd 2,5%-os ló normál szérummal (VECTOR) kezeltük őket 20 percig 25°C-on, a nem specifikus fehérje-kötőhelyek blokkolására. Közvetlenül e lépés után a szöveteket az elsődleges ellenanyaggal kezeltük (lásd a 3. táblázatban szereplő hígításokat és specifikációkat), és egy éjszakán át állni hagytuk 4°C-on, párás kamrában. A primer antitestek minden hígítását 1%-os szarvasmarha-szérumalbuminban (BSA) készítettük.

Marker Cell Szállító Molekular. target Clone Origin species/target Dilution Anti-CD54 Aktivált endotélsejt Serotec Adhéziós molekula (ICAM 1) 1A29 Eger-patkány 1 : 10 (5 μg/mL) Anti-CD18 Leukociták Serotec Adhéziós molekula (Integrin β2) WT.3 Eger-patkány 1 : 10 (5 μg/ml) Anti-CD163 Monociták és makrofágok Serotec felületi glikoprotein (ED2) ED2 Eger-patkány 1 : 10 (5 μg/ml) Anti-MAC 387 Monociták, makrofágok AbCAM Intracitoplazmatikus fehérje (kalprotektin) poliklonális nyúl-patkány 1 : 20 (50 μg/mL) Anti-CD45RA B limfociták Serotec felületi fehérje (LCA) OX-33(csak B sejtek) egér-patkány 1 : 10 (5 μg/mL) Anti-CD3 T limfociták AbCAM TCR-asszociált fehérje poliklonális nyúl-patkány 1 : 5 (40 μg/ml)

3. táblázat

Az immunhisztokémiában használt markerek.

A következő napon a metszeteket 6 percig PBS-ben (sigma) mostuk, majd polimer-peroxidázzal konjugált másodlagos ellenanyaggal (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR) kezeltük, 25°C-on 30 percen át. Egy újabb PBS-ben történő mosás után (6 perc) 3 másodpercig DAB (DAKO), majd ismét csapvízzel mostuk, Harris hematoxilinnel festettük (01 perc) és montíroztuk.

2.6. Hisztomorfometria

A hízósejtek degranulációs százalékának értékeléséhez tárgylemezenként kétszáz, toluidinkék módszerrel festett sejtet számoltunk meg, összefüggő mezőkön, megkülönböztetve a degranulált és a nem degranulált sejteket. A nyirokerek átmérőjének értékeléséhez öt véletlenszerűen kiválasztott mezőt 200 x objektívvel értékeltünk ki. Minden egyes mezőről fotomikroszkópiát készítettünk (CANNON), és digitális képelemző rendszerrel (Image Tool 3.0) meghatároztuk a nyirokerek területének százalékos arányát mezőnként. A nyirokerek átmérője a korábbi megfigyelések szerint jó paraméternek tekinthető a nyiroködéma felszívódásának értékelésére . Mivel a protokoll akut eseményekről szólt, a lymphangiogenezis hipotézisét nem vettük figyelembe.

Az anti-CD45RA, CD3, CD18, CD163 és MAC 387 markerek esetében tárgylemezenként tíz véletlenszerűen kiválasztott mikroszkópos mezőt figyeltünk meg, immersziós objektívvel (1000 x nagyságú). Ezek magukban foglalták a párna szinte valamennyi bőr alatti érrendszeri kötőszövetét, és mezőnként feljegyezték a pozitív sejtek számát. Az Anti-MAC 387 esetében csak a mononukleáris pozitív sejteket vettük figyelembe. A hematoxilin-eozin festésű tárgylemezeket használtuk a PMN-sejtek mezőnkénti számának megszámlálásához. Ebben az esetben a sejtek felismerése csak morfológiai kritériumok alapján történt. A CD163 expressziója arányos a makrofág érettséggel, emiatt ezeket az eredményeket a CD163/MAC 387 mononukleáris pozitív sejtek mezőnkénti arányaként fejeztük ki.

Az Anti-CD54 esetében az endotélsejtek felszínén a pozitivitás intenzitását 1-től 4-ig terjedő pontrendszerrel értékeltük. Öt véletlenszerűen kiválasztott mezőt értékeltünk diánként, immersziós objektívvel (1000 x nagyságú), és a pontozást két független megfigyelő végezte, vakon, hogy elkerüljük a szubjektív értelmezést az elemzésben. Az egyes diák végső pontszáma megegyezett a részpontszámok összegével. A pontszámok osztályozásának kritériumait a 4. táblázat tartalmazza.

Score Description Photomicrography Photomicrographia (objektív 10 x) 1 Egyenletes és diszkontinuus membránjelzés, nagysága 1000 x. 2 Reguláris, de diszkontinuus membránjelölés, nagyság 1000 x. 3 Erős, de diszkontinuus membránjelölés, nagyság 1000 x. 4 Erős és folyamatos membránjelölés, nagyság 1000 x.

4. táblázat

A pontszámok megadásának kritériumai az endothelsejtek jelölésének különböző mintázataihoz.

2.7. táblázat. Statisztikai elemzés

A Bartlett-tesztet először az adatpontok többségének Gauss-eloszlásának meghatározására alkalmaztuk. Ezután a Bartlett-eredményeknek megfelelően ANOVA/Tuckey-Krammer vagy Kruskall-Wallis/Dunn vizsgálatot végeztünk. A hízósejtek degranulációjának értékelését ehelyett a teszttel értékeltük. Az értékeket szignifikánsnak tekintettük. Minden statisztikai elemzést az INSTAT 3 szoftverrel végeztünk.

Az ödémával kapcsolatban további csoporton belüli statisztikai elemzést is végeztünk, és az ödéma intenzitásának összehasonlítása az alcsoportok között 30 percnél (spontán ödéma) szignifikáns különbségeket mutatott (Tuckey-Krammer, ), ami validálta a javasolt kísérleti elrendezést.

2.8. Az ödéma intenzitásának összehasonlítása az alcsoportok között. Bioetikai kritériumok

A protokollt az Universidade Paulista Bioetikai Bizottsága hagyta jóvá (011/07-es protokoll), São Paulo állam 11.977/05 számú törvényének megfelelően (São Paulo állam, Brazília állatvédelmi törvénykönyve). Ez az eljárás összhangban van a kísérleti és egyéb tudományos célokra felhasznált gerinces állatok védelméről szóló európai egyezménnyel és annak függelékével.

3. Eredmények

A gyulladt talppárnák szövettani aspektusa a tipikus korai akut gyulladás klasszikus kereteit mutatta: ödéma és sejtinfiltrátum, amely 2/3-ban PMN sejteket és 1/3-ban mononukleáris sejteket tartalmaz. A csoporton belüli statisztikai kezelést figyelembe véve azonban az idő függvényében a gyulladásos folyamat fejlődésének különböző mintázatai voltak azonosíthatók (5. és 6. táblázat). Így az Arnica montana 6cH hatásának elemzése előtt szükség volt e minták rendszerezésére és osztályozására.

Eszerint az Arnica montana 6cH szignifikáns ödémaellenes hatása csak a patkányok azon alcsoportjában volt kimutatható (ANOVA, ), amelyeknél az ödéma csúcspontja 30 és 180 perccel a karragén lábtőbe történő beadása után jelentkezett (úgynevezett késői alcsoport) (1. ábra). A toluidinkékkel festett tárgylemezek hisztomorfometriai elemzése azt is kimutatta, hogy a késői alcsoportban a hízósejtek kevésbé intenzív degranulációja (, ) és a nyirokerek átlagos átmérője is nagyobb volt (Kruskal-Wallis, ). Ezzel szemben a korai alcsoportban (az ödéma csúcspontja 30 perc előtt) csak a hízósejtek degranulációjának diszkrét, de szignifikáns növekedése volt megfigyelhető (, ), valamint az endotélsejtek CD54-expressziójának növekedése (Kruskal-Wallis, ) (5. és 6. táblázat, 2. és 5. ábra).

(a)

(b)

(a)
(b)

.

2. ábra

A degranulált hízósejtek százalékos arányát és a nyirokterületet (pixelek) mezőnként ábrázoló hisztogram. (a) A korábban ödémát kialakító alcsoport; (b) a később ödémát kialakító alcsoport. , a kontrollhoz viszonyítva. **Kruskal-Wallis, a dexametazon csoporthoz viszonyítva.

Nincs különbség a csoportok és alcsoportok között a sejtvándorlás tekintetében, figyelembe véve a PMN-sejteket és az immunhisztokémiai elemzésben használt összes markert, beleértve a CD 163+/MAC 387+ sejtek arányát (5. és 6. táblázat, 3., 4. és 5. ábra).

(a)

(b)

(a)
(b)

3. ábra

A MAC387 pozitív sejtek számát mezőnként bemutató hisztogram, a CD163/MAC387 arányt és a polimorfonukleáris sejtek számát mezőnként. (a) A korábban oedemát kialakító alcsoport; (b) a később oedemát kialakító alcsoport. ANOVA, szignifikancia nélkül.

(a)

(b)

(a)
(b)

(a)

(b)

(a)
(b)

Az összes adatot összevetve a fő következtetést az ödéma intenzitásának szórásos grafikonjával lehet szemléltetni, amelyen a csoportok és alcsoportok közötti eltérő tendenciák láthatók, az Arnica montana 6cH kezelés után (6. ábra). Megjegyzendő, hogy az Arnica-val kezelt és késői ödémát mutató állatok (késői alcsoport) a többi csoporthoz képest az alapvonalhoz képest eltolódtak.

(a)

(b)

(a)
(b)

.

6. ábra

A szórás ábrázolása, amely az ödéma időbeli alakulásának eltérő tendenciáit mutatja a két alcsoport között. A fehér pontok a kontrollt, a fekete pontok az Arnica montana 6cH-t, a szürke pontok pedig a dexametazont jelölik. Minden grafikonon a -tengely a karragén injekció beadása előtti 30 percben, a -tengely pedig a kísérlet végén kialakult ödémát mutatja. LATE = késői ödéma alcsoport; EARLY = korai ödéma alcsoport. Megjegyezzük, hogy az ödéma késői csúcsát mutató és Arnica montana 6cH-val kezelt állatok a többi csoporthoz képest az alapvonalhoz képest eltolódtak.

7. ábra

A kísérleti lépések folyamatábrája, a patkányok két alcsoportjának meghatározása az ödéma kinetikája szerint.

4. Megbeszélés

A gyulladáscsökkentésben különösen érdekelt homeopátiás gyógyszerek közül az Arnica montana az egyik legtöbbet vizsgált . Mindazonáltal a homeopátiáról szóló legújabb tudományos irodalomban számos tanulmány keresi a hatásosságának bizonyítását, de kevés munka foglalkozik a szövetekben bekövetkező fiziopatológiai változások megértésével az állatok e gyógyszereknek való kitettségét követően . Ebből a szempontból épült fel a jelen munka; a gyulladt kötőszövet részletes vizsgálatán keresztül, figyelembe véve az oda vándorló sejtek alcsoportjait, az erek viselkedését és e folyamat időfüggő dinamikáját az Arnica montana 6cH hatására. Érdekes módon néhány megfigyelt hatás összhangban van a korábban megfigyelt eredményekkel, mint például a nyirokerek nyitása és az ödéma ebből következő csökkenése .

Az itt kapott első eredmények egy érdekes tényre mutatnak rá: az egyes alcsoportok egyedi elemzése az időbeliség fontosságát mutatja az Arnica montana 6cH hatásában; azok az állatok, amelyeknél az ödéma spontán késői csúcspontja (30 perccel az irritáló injekció beadása után) érzékenyebbek voltak az Arnica-ra, mint azok az állatok, amelyeknél az ödéma korai csúcspontja (30 perc előtt) volt. Ebben az esetben az ödéma még kevésbé volt intenzív, mint a kontroll és a dexametazon kezelt csoportokban, és ez a tény a hízósejtek degranulációjának jelentős csökkenésével és a nyirokerek átmérőjének növekedésével járt együtt. Mindkét jelenség hozzájárulhat a makroszkopikus ödéma csökkenéséhez, és különbözik a dexametazon mintától, amelyben a nyirokerek területe passzívan csökken az ödéma csökkenésével együtt, amint az a 2. ábrán látható. Ez a hatás megerősíti a korábban megfigyelt eredményeket .

A karragén a Chondrus crispus tengeri moszatból nyert poliszacharid, amely képes helyi gyulladást kiváltani, szisztémás hatások nélkül . Klasszikusan ismert, hogy a szubkután karragén injekciót követő ödémaképződés során prosztaglandinok keletkeznek a vándorló neutrofilek által . Az Arnica montana 6cH ödémaellenes hatásának megfigyelése kizárólag az akut gyulladás késői mintázatát mutató állatokban utal a különböző kémiai mediátorok részvételére a szabályozó utakban, amint azt korábban kimutatták . Ebben az értelemben a hisztamin és a prosztaglandin, olyan mediátorok, amelyek hatáscsúcsa 15-30 perc felé esik, valószínűleg modulálják ezt a folyamatot a késői ödéma alcsoportban, a nagyon korai hatású mediátorok helyett, mint például a bradikinin, amelynek csúcsa körülbelül 10 perccel a felszabadulás után van .

Kísérleti modelleket, amelyeket kifejezetten az egyéni variáció jelentőségének kimutatására terveztek a homeopátiás gyógyszerek hatásában, már korábban is leírtak, de gyulladásos protokollban még soha. Az egyéniség a homeopátiás gyógyászatban specifikumot jelent; Rocha 2008-ban , csak a természetesen hiperaktív patkányok voltak felelősek a Rhus toxicodendron 200cH kezelésre, ami a nyílt terepen történő viselkedésüket illeti. Másrészt Soares 2007 megfigyelte, hogy csak a hipoaktív patkányok voltak felelősek a Bryonia alba 200cH kezelésre. Ezek az egymást kiegészítő vizsgálatok a vonatkozó materia medica-val összeegyeztethető eredményeket mutatnak. A két tanulmány és mások szisztematikus összehasonlítása látható .

A PMN és mononukleáris leukocita altípusok sejtmigrációját illetően nem volt különbség a csoportok és alcsoportok között, és a CD163+/MAC387+ arány sem mutatott semmilyen változást a makrofág érés dinamikájában a gyulladásos helyen. A CD 163 egy 175 kD-s, I-es típusú transzmembrán glikoprotein, amelyet ED2 fehérjének is neveznek. Jelenlétét az érett makrofágok felszínén, de kevésbé intenzív módon az éretlen monocitákban és más mononukleáris sejtekben is leírták emberben. Az ED 2 expressziója a vasanyagcseréhez kapcsolódik, és a gyulladás későbbi fázisaiban fokozódik, mivel a pozitív sejtek modulátori szerepet töltenek be, autokrin IL10-et szabadítva fel. A T- és B-limfociták jelenléte a gyulladásos helyen összefügghet egy bizonyos modulátori hatással , amit az Arnica montana 6cH-val kapcsolatos korábbi tanulmányok már feltételeztek, de itt nem erősítették meg.

A CD 54 (ICAM-1) adhéziós molekulák expressziója nagyobb volt az Arnica montana 6cH-val kezelt állatokban, amelyek a gyulladás korai mintázatát mutatták, és a gyulladt szövetben a degranulált hízósejtek nagyobb arányával, de nem a nagyobb leukocita migrációval volt összefüggésben. Bár a vizsgálatnak ebben a szakaszában nem lehetett mechanisztikus magyarázatot adni, úgy tűnik, hogy a globális eredmények két fő mintázatra oszlanak: az érrendszeri dinamika szabályozására, ami a késői ödéma alcsoportban nyilvánvaló, és a sejtes események szabályozására, ami a korai ödéma alcsoportban nyilvánvaló, ami az Arnica montana 6cH által az érrendszeri és sejtes gyulladásos események egyénfüggő minőségi beállítására utal, amint az a 6. ábrán látható. Ezeket a különböző változékonysági mintákat, amelyek a vizsgált biológiai rendszer korábbi állapotának megfelelően oszcillálnak, kísérletileg leírták más kísérleti kontextusokban különböző homeopátiás készítményekkel .

Végeredményben a két javasolt hipotézist lehet kiemelni: (a) az Arnica montana 6cH kezeléssel nem a leukocita alcsoportok migrációjának szelektív modulációja, hanem csak az érrendszeri szabályozások, a nyirokfelszívódás, a CD54 expresszió és a hisztamin degranuláció tekintetében, és (b) az Arnica montana 6cH kezelés után az érrendszeri események egyéni kinetikai variációjának egyértelmű interferenciája.

Érdekellentét

Ezzel a munkával kapcsolatban nincs érdekellentét.

Köszönet

A szerzők köszönetet mondanak a CAPES-PROSUP programnak és a FAPESP Proc. no. 2007/59661-5 a pénzügyi támogatásért; Marcia Gutierreznek a Farmacia Sensitiva-tól a gyógyszerek biztosításáért; Fernanda Ferrarinak, Paulo Ailton Valdovatónak és Lika Osuguinak a technikai támogatásért.