Inflammatorisen prosessin modulointi homeopaattisella Arnica montana 6CH: yksilöllisen vaihtelun rooli

Abstract

Arnica montana 6cH:n vaikutuksia akuutin tulehduksen kinetiikan yksilölliseen modulointiin rotilla arvioitiin. Aikuisille urospuolisille Wistar-rotille inokuloitiin 1-prosenttista karrageeniä jalkapohjaan ja niitä käsiteltiin Arnica montana 6cH:lla, deksametasonilla (4,0 mg/kg; positiivinen kontrolli) tai 5-prosenttisella hydroalkoholiliuoksella (negatiivinen kontrolli) per os, kukin 15 minuutin ajan 30-180 minuuttia ärsyttävän inokulaation jälkeen. Histopatologiset ja immunohistokemialliset menetelmät tehtiin CD3:n (T-lymfosyytit), CD45RA:n (B-lymfosyytit), CD18:n (beeta 2 -integriini), CD163:n (ED2-proteiini), CD54:n (ICAM-1) ja MAC 387:n (monosyytit ja makrofaagit) tulehdusreaktioita aiheuttavien positiivisten solujen paneelin määrittämiseksi. Tietojen tilastolliseen käsittelyyn sisältyi kunkin ryhmän () eläinten jälkikäteinen luokittelu kahteen alaryhmään, joissa esiintyi spontaania ennenaikaista tai myöhäistä turvotusta. Eläimet, joilla esiintyi ennenaikaista turvotusta, olivat vähemmän vastuussa Arnica montana 6cH:lle hemodynaamisten muutosten suhteen. Sen sijaan rotat, joilla esiintyi myöhäistä turvotusta, esittivät vähemmän voimakasta turvotusta (), pienempää mastosolujen degranulaation prosenttiosuutta () ja imusuonten halkaisijan kasvua (). Tiedot viittaavat siihen, että Arnica montana 6cH säätää yksilöllisesti laadullisesti tulehduksellisia verisuonitapahtumia.

1. Johdanto

Yksi eniten keskustelua herättäneistä homeopaattisten lääkkeiden tehoa koskevista kiistoista on tarve tunnistaa täydellinen oireiden analogia potilaan ja lääkkeen patogeneesin välillä, toisin sanoen similia-periaatteen mukaisen yksilöllisen lääkemääräyksen välttämättömyys. Tämä erityispiirre on yksi alan tieteellisen tutkimuksen vaikeimmista haasteista, koska sen kokeellinen osoittaminen on teknisesti vaikeaa. Kirjallisuudesta löytyy vain vähän kokeellisia tutkimuksia tästä aiheesta. Tämän erityispiirteen kokeellinen osoittaminen ja sen mekanismien ymmärtäminen voivat siis olla hyödyllisiä välineitä, joiden avulla voidaan ratkaista homeopatian tehoa koskevat krooniset kiistat, joita esiintyy usein kliinisissä tutkimuksissa. Hiljattain elegantti in vitro -tutkimus osoitti säätely- ja adaptiivisten solumekanismien merkityksen syöpäsolujen sytotoksisia vaikutuksia aiheuttavien homeopaattisten lääkkeiden suuruusluokassa .

Vuodesta 1997 vuoteen 2008 olemme kehittäneet vaiheittaisen tutkimuskokeilun homeopaattisen Arnica montanan, erityisesti Arnica montana 6cH:n, biologisista vaikutuksista eläinmalleja käyttäen . Lyhyesti sanottuna näissä tutkimuksissa saadut tulokset osoittavat, että Arnica montana 6cH pystyy muokkaamaan akuuttia tulehdusprosessia rotilla, koska se voi lisätä lymfaattisen ödeeman imeytymistä ja paikallista verenkiertoa sekä edistää polymorfonukleaaristen solujen migraatiota. Kaikki nämä kokeet on kuvattu kronologisesti osoitteessa .

Arnica montana on Compositae-heimoon kuuluva kasvi, joka kasvaa Itä- ja Keski-Euroopan kukkuloilla. Sen lehdistä, kukista ja juurista on tunnistettu useita aktiivisia yhdisteitä, kuten alkoholeja, tanniinia, flavonoideja ja sesquirterpeenilaktoneja, erityisesti helenaliinia . Helenaliinin tärkein vaikutus on transkriptiotekijä NFκβ:n estäminen kortikoidisteroidien tapaan. Kasvin satunnainen nauttiminen voi aiheuttaa verisuonten laajentumista, veritukoksia, verenvuotoa, turvotusta ja kipua. Nämä vaikutukset ovat tärkeimmät Arnica montana materia medica -teoksessa kuvatut aiheet. Tämän vuoksi traumakipu ja turvotuksen imeytyminen ovat tärkeimpiä indikaatioita Arnica montanan homeopaattisten valmisteiden kliiniseen ja kokeelliseen käyttöön. Viime aikoina on ehdotettu muitakin vahvasti laimennetun Arnica montanan käyttötapoja, kuten Arnican agronomista käyttöä potensseissa 3, 6 ja 12cH kasvien kasvun parantamiseksi .

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tarkistaa kaksi hypoteesia: (Tarkoituksena oli keskittyä tulehduskohdassa olevien neutrofiilien, monosyyttien, T- ja B-lymfosyyttien määrään ja adheesiomolekyylien ilmentymisen voimakkuuteen tulehtuneessa sidekudoksessa immunohistokemiallisin ja histomorfometrisin tekniikoin; b) tulehduskinetiikan luonnollisten yksilöllisten vaihteluiden oletettuun vaikutukseen.

2. Aineisto ja menetelmät

2.1. Aineisto ja menetelmät. Eläimet

Käytettiin urospuolisia aikuisia Wistar-rotteja, joiden paino oli 250-300 g. Rotat pidettiin tavanomaisissa laboratorion polypropeenihäkeissä (5-7 eläintä häkkiä kohti), joissa oli säädetty lämpötila (25 ± 3 ° C) ja valojakso (valot päällä 06:00 aamusta 06:00 iltapäivään). Vettä ja ruokaa tarjottiin ad libitum. Ennen kokeen aloittamista eläimet punnittiin satunnaisesti, erotettiin toisistaan ja yksilöitiin kolmeen ryhmään, joissa kussakin oli 20 rottaa.

2.2. Eläimet punnittiin satunnaisesti. Akuutin tulehduksen indusointi

Akuutti tulehdusprosessi indusoitiin injektoimalla ihon alle steriiliin keittosuolaliuokseen laimennettua 1 %:n kappakarrageeniä (SIGMA) jalkapohjiin, joiden paksuus mitattiin etukäteen mikrometrillä (MYTUTOYO).

30 ja 180 minuutin kuluttua tehtiin uudet mittaukset, jotta voitiin arvioida hoitoa edeltäneenä ja sitä seuranneen ödeeman kehittymistä ajan funktiona. Näin ollen ensimmäiset 30 minuuttia mitattiin spontaania turvotuksen muodostumista ja loput 150 minuuttia lääkkeen vaikutuksia, koska hoidot tehtiin 30 minuutin mittauksen jälkeen. Eläimet lopetettiin 180 minuutin kohdalla kohdunkaulan vedolla syvässä anestesiassa, ja jalkaterät kerättiin ja kiinnitettiin puskuroituun 10-prosenttiseen formaldehydiin enintään 24 tunnin ajaksi ennen kuin ne käsiteltiin tavanomaisilla histologisilla tekniikoilla, mukaan lukien parafiiniin upottaminen, hematoksyliini-eosiini- ja toluidiinisinivärjäys. Samoja parafiinilohkoja käytettiin immunohistokemiallisten menetelmien suorittamiseen. Kustakin jalkaterästä tehtiin yksi preparaatti.

2.3. Ryhmät ja käsittelyt

Jokaista rottien ryhmää käsiteltiin tietyllä aineella taulukon 1 mukaisesti. Rotat, joita hoidettiin Arnica montana 6cH:lla (kokeellinen) ja samalta toimittajalta saadulla 5-prosenttisella hydroalkoholiliuoksella (negatiivinen kontrolli), yksilöitiin koodeilla siten, että kaikki käsittelyt ja mittaukset tehtiin sokkona. Koodit loi laboratorioteknikko, joka ei osallistunut tutkimukseen, ja ne säilytettiin sinetöidyssä arkissa tilastolliseen analyysiin asti, jolloin ne paljastettiin.

Deksametasonilla käsitellyt rotat (positiivinen kontrolli) tehtiin avoimesti, koska käytetyn valmisteen fysikaaliset ominaisuudet; se oli aivan erilainen kuin homeopaattiset ja siten helposti tunnistettavissa. Käsittelyn ja näytteiden mikroskooppisen analyysin suoritti kaksi riippumatonta henkilöä aina sokkona. Tulehdusta ehkäisevien vaikutusten aikaansaamiseksi käytetty deksametasonin kokonaisannos oli 4 mg/kg aiemmin määriteltyjen standardien mukaisesti. Tämä fraktioitu protokolla oli suunniteltu jäljittelemään tavanomaista homeopaattista kliinistä tilannetta akuutin tulehduksen hoidossa, ja sitä käytettiin myös ryhmämme aiemmissa tutkimuksissa. Deksametasoni valittiin positiiviseksi kontrolliryhmäksi, koska sen vaikutusmekanismi jäljittelee Arnica montanan tärkeimmän vaikuttavan aineen, helenaliinin, vaikutusmekanismia.

Kaupallinen Arnica montana 6cH valmistettiin 5-prosenttisena hydroalkoholiliuoksena apteekissa, jonka on sertifioinut Brasilian kansallinen terveysvalvontavirasto (ANVISA), Farmácia Sensitiva, São Paulo. Valmistuksessa käytetyt tekniikat olivat Brasilian homeopaattisen farmakopean (Brasilian Homeopathic Pharmacopea, 2. painos, 1997) mukaiset.

2.4. Tietojen analysointi

Ensimmäisen esikäsittelyn aikana (nollasta 30 minuuttiin) saadun turvotuksen voimakkuuden kuvaamisen jälkeen tiedot luokiteltiin puolikuun järjestykseen Excel 2003 -ohjelmistolla siten, että jokaisessa ryhmässä voitiin jakaa 10 rottaa (50 %), joilla oli spontaanisti alhaisempi turvotuksen voimakkuus, ja 10 rottaa (50 %), joilla oli korkeampi turvotuksen voimakkuus. Näin kullekin koeryhmälle muodostettiin kaksi 10 eläimen alaryhmää, jotka luonnehtivat kahta erilaista rottien alaryhmää tulehduskineettisen mallin mukaan (taulukko 2). Koko koejärjestely selitetään vuokaaviossa (kuva 7).

Koska karrageenin aiheuttaman turvotuksen klassinen käyrä on yli jopa 6 tuntia inokulaation jälkeen, molempien ajankohtien (30 ja 180 minuuttia) valinta perustui sen tunnettuun tasoon . Lisäksi aiemmat tutkimukset Arnica 6cH:n vaikutuksista karrageenin aiheuttamaan turvotukseen eivät osoita enää vaikutuksia tämän ajanjakson jälkeen. Tulehdusprosessin arvioinnin kinetiikka karrageenin injektion jälkeen on klassinen kokeellinen malli, joka on kehitetty 70-luvulla . Näin ollen se on luotettava kriteeri, jota voidaan käyttää tässä tapauksessa.

Tietojen piirtämisen jälkeen (kuvat 1(a) ja 1(b)) molemmat kineettiset mallit oli helppo tunnistaa: (a) eläimillä, joilla esiintyi vähemmän voimakasta turvotusta ensimmäisen esikäsittelyn 30 minuutin aikana, oli huippu 30 ja 180 minuutin välillä (nimetty myöhäiseksi turvotukseksi) ja (b) eläimillä, joilla esiintyi voimakkaampaa turvotusta ensimmäisten 30 minuutin aikana, turvotus väheni tämän ajanjakson jälkeen (nimetty varhaiseksi turvotukseksi).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)

(b)

(c)

(d)
(a)
(b)
(c)
(d)

Kaikkia tuloksia verrattiin kuuden alaryhmän kesken. Tämä a posteriori -valinta tehtiin, jotta voitiin tarkistaa yksilöllisen idiosynkrasian merkitys Arnican vaikutuksessa similia-periaatteen mukaisesti, koska turvotuksen remissioiden nopeus on yksi tunnetuimmista materia medicassa kuvatuista Arnica montana -oireista.

2.5. JOHTOPÄÄTÖKSET. Immunohistokemiallinen analyysi

Kaikki objektilasit pestiin 1 : 1 alkoholi-eetteriliuoksella viiden minuutin ajan ja kuivattiin sen jälkeen pehmeällä paperiarkilla ja käsiteltiin 1 : 10 poly-L-lysiinillä (SIGMA). Tämän jälkeen niiden pinnalle siirrettiin 5 mikronin parafiiniin upotettuja kudosviipaleita 40 °C:n histologisessa kylvyssä. Seuraavaksi viipaleet poistettiin parafiinista kahdessa kylvyssä absoluuttisessa ksylolissa 2 minuutin ajan ja kahdessa kylvyssä absoluuttisessa alkoholissa 3 minuutin ajan. Tämän jälkeen objektilasit pestiin juoksevalla vesijohtovedellä.

Immunohistokemiallisia menetelmiä varten ensimmäinen vaihe antigeenin talteenottoa varten tehtiin käyttämällä näytteiden lämpökäsittelyä. Objektiolevyt laitettiin sitraattipuskurikylpyyn (SIGMA), pH = 6,0, joka sisälsi 0,5 % tween 20:tä (DAKO), ja niitä lämmitettiin sähköpannussa 80 °C:ssa (PANASONIC) 20 minuutin ajan. Tämän jälkeen objektilasit pestiin PBS:ssä, pH = 7,2 (SIGMA), 6 minuutin ajan ja kuivattiin pehmeällä imukykyisellä paperilla, ja kudosnäyte rajattiin sopivalla kynällä (Pap-pen, AbCam).

Kudosten endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin inkuboimalla kudoksia 3-prosenttisessa H2O2-liuoksessa, joka oli laimennettu metanoliin (ISOFAR), 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen ne pestiin PBS:ssä (SIGMA) 6 minuutin ajan ja käsiteltiin 2,5 %:lla hevosen normaaliseerumilla (VECTOR) 20 minuutin ajan 25 °C:ssa epäspesifisten proteiinien sitoutumiskohtien estämiseksi. Välittömästi tämän vaiheen jälkeen kudokset käsiteltiin primaarivasta-aineella (ks. laimennokset ja spesifikaatiot taulukossa 3) ja jätettiin seisomaan yön yli 4 °C:ssa kosteassa kammiossa. Kaikki primaarivasta-aineiden laimennokset tehtiin 1-prosenttiseen naudan seerumin albumiiniin (BSA).

Seuraavana päivänä leikkaukset pestiin PBS:llä (sigma) 6 minuutin ajan ja käsiteltiin polymeeri-peroksidaasikonjugoidulla sekundäärisellä vasta-aineella (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR) 25 °C:ssa 30 minuutin ajan. Uuden pesun jälkeen PBS:ssä (6 minuuttia) ne altistettiin DAB:lle (DAKO) 3 sekunnin ajan, pestiin vielä kerran vesijohtovedellä, värjättiin Harrisin hematoksyliinillä (01 minuuttia) ja kiinnitettiin.

2.6. Histomorfometria

Mastosolujen degranulaatioprosentin arvioimiseksi laskettiin kaksisataa Toluidiinisinämenetelmällä värjättyä solua objektilasia kohti käyttäen vierekkäisiä kenttiä ja erottamalla degranuloituneet solut ei-degranuloituneista. Imusuonten läpimitan arvioimiseksi arvioitiin viisi sattumanvaraisesti valittua kenttää 200-kertaisella objektiivilla. Jokaisesta kentästä otettiin mikroskooppikuva (CANNON), ja imusuonten pinta-alan prosenttiosuus kenttää kohti määritettiin digitaalisella kuva-analyysijärjestelmällä (Image Tool 3.0). Lymfaattisten verisuonten halkaisijaa voidaan aiempien havaintojen mukaan pitää hyvänä parametrina arvioitaessa lymfaattisen ödeeman imeytymistä. Koska protokolla koski akuutteja tapahtumia, lymfangiogeneesihypoteesia ei otettu huomioon.

Anti-CD45RA-, CD3-, CD18-, CD163- ja MAC 387 -merkkiaineita varten havaittiin kymmenen sattumanvaraisesti valittua mikroskooppista kenttää objektilasia kohti käyttämällä upotusobjektiivia (suuruus 1000 x). Ne sisälsivät lähes kaikki tyynyn ihonalaiset verisuonten sidekudokset, ja positiivisten solujen lukumäärä kenttää kohti kirjattiin ylös. Anti-MAC 387:n tapauksessa otettiin huomioon vain mononukleaariset positiiviset solut. Hematoksyliini-eosiinivärjättyjä objektiolevyjä käytettiin PMN-solujen lukumäärän laskemiseen kenttää kohti. Tässä tapauksessa solujen tunnistaminen tehtiin ainoastaan morfologisten kriteerien perusteella. CD163:n ilmentyminen on verrannollinen makrofagien kypsymiseen, minkä vuoksi nämä tulokset ilmaistiin CD163/MAC 387 mononukleaaristen positiivisten solujen suhteena kenttää kohti.

Anti-CD54:n osalta positiivisuuden voimakkuutta endoteelisolujen pinnalla arvioitiin pisteytysjärjestelmällä, joka vaihteli 1:stä 4:ään. Viisi sattumanvaraisesti valittua kenttää arvioitiin dioittain käyttäen immersio-objektiivia (suuruus 1000 x), ja pisteytyksen teki kaksi riippumatonta tarkkailijaa sokeasti, jotta vältettäisiin subjektiivinen tulkinta analyysissä. Kunkin dian lopullinen pistemäärä oli osapisteiden summa. Pisteytyksen kriteerit on esitetty taulukossa 4.

Pisteytys Kuvaus Kuvaus Fotomikrografia (objektiivi 10 x) 1 Heikko ja epäjatkuva kalvomerkintä, suuruusluokka 1000 x. 2 Säännöllinen mutta epäjatkuva kalvomerkintä, suuruus 1000 x. 3 Tiheä mutta epäjatkuva kalvomerkintä, suuruus 1000 x. 4 Tiheä ja jatkuva kalvomerkintä, suuruus 1000 x.

Taulukko 4

Pisteiden antamisen kriteerit endoteelisolujen merkintöjen eri kuvioille.

2.7. Tilastollinen analyysi

Ensin käytettiin Bartlettin testiä Gaussin jakauman määrittämiseksi suurimmalle osalle datapisteistä. Sitten suoritettiin ANOVA/Tuckey-Krammer tai Kruskall-Wallis/Dunn Bartlettin tulosten mukaan. Sen sijaan syöttösolujen degranulaation arviointi arvioitiin testillä. Arvoja pidettiin merkitsevinä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin INSTAT 3 -ohjelmistolla.

Ödeeman osalta suoritettiin myös ylimääräinen ryhmien sisäinen tilastollinen analyysi, ja alaryhmien välisen ödeeman voimakkuuden vertailu 30 minuutin kohdalla (spontaani ödeema) osoitti merkitseviä eroja (Tuckey-Krammer, ), mikä vahvisti ehdotetun koeasetelman.

2.8. Kokeiden tulokset. Bioeettiset kriteerit

Protokolla hyväksyttiin Universidade Paulistan bioetiikkakomiteassa (protokolla 011/07) São Paulon osavaltion lain nro 11.977/05 (São Paulon osavaltion eläinsuojelusäännöstö, Brasilia) mukaisesti. Menettely on kokeellisiin ja muihin tieteellisiin tarkoituksiin käytettävien selkärankaisten eläinten suojelua koskevan eurooppalaisen yleissopimuksen ja sen liitteen mukainen.

3. Tulokset

Tulehtuneiden jalkapohjien histopatologinen näkökohta paljasti tyypillisen varhaisen akuutin tulehduksen klassiset puitteet: ödeema ja soluinfiltraatti, joka vastaa 2/3:a PMN-soluja ja 1/3:a mononukleaarisia soluja. Ryhmien sisäisen tilastollisen käsittelyn perusteella voitiin kuitenkin todeta, että tulehdusprosessin kehityksessä oli erilaisia malleja ajan funktiona (taulukot 5 ja 6). Näin ollen oli tarpeen systematisoida ja luokitella nämä mallit ennen Arnica montana 6cH:n vaikutusten analysointia.

Sen mukaan Arnica montana 6cH:n merkitsevä antiödeemaattinen vaikutus voitiin havaita (ANOVA, ) vain niiden rottien alaryhmässä, joilla ilmeni ödeemahuippu 30-180 minuutin kuluttua karrageenin injektoinnista jalkapohjiin (ns. myöhäinen alaryhmä) (kuva 1). Toluidiinisinisellä värjättyjen diojen histomorfometrinen analyysi osoitti myös, että myöhäisessä alaryhmässä mastosolujen degranulaatio oli vähäisempää (, ) ja imusuonten keskimääräinen läpimitta oli suurempi (Kruskal-Wallis, ). Sen sijaan varhaisessa alaryhmässä (turvotuksen huippu ennen 30 minuuttia) havaittiin vain hienovaraista mutta merkittävää mastosolujen degranulaation lisääntymistä (, ) sekä endoteelisolujen CD54-ekspressiopisteiden lisääntymistä (Kruskal-Wallis, ) (taulukot 5 ja 6, kuvat 2 ja 5).

(a)

(b)

(a)
(b)

Ryhmien ja alaryhmien välillä ei havaittu eroa solujen migraation suhteen, kun otetaan huomioon PMN-solut ja kaikki immunohistokemiallisessa analyysissä käytetyt merkkiaineet, mukaan lukien CD 163+/MAC 387+ -solujen suhde (taulukot 5 ja 6, kuvat 3, 4 ja 5).

(a)

(b)

(a)
(b)

Kuvio 3

Histogrammi, joka kuvaa MAC387-positiivisten solujen lukumäärää kenttää kohti, CD163/MAC387-suhde ja polymorfonukleaaristen solujen lukumäärä kenttää kohti. (a) Alaryhmä, jolle kehittyi varhaisempi turvotus; (b) alaryhmä, jolle kehittyi myöhempi turvotus. ANOVA, ilman merkitsevyyttä.

(a)

(b)

(a)
(b)

Kuva 4

Histogrammi, joka esittää CD3- ja CD45R-positiivisten solujen määrän kenttää kohti. (a) Alaryhmä, jolle kehittyi varhaisempi turvotus; (b) alaryhmä, jolle kehittyi myöhempi turvotus. ANOVA, ilman merkitsevyyttä.

(a)

(b)

(a)
(b)

Kokoamalla kaikki tiedot yhteen voidaan pääjohtopäätöstä havainnollistaa ödeeman voimakkuuden hajontakuvaajalla, jossa näkyvät ryhmien ja alaryhmien väliset erilaiset kehityssuunnat Arnica montana 6cH -hoidon jälkeen (kuva 6). Huomaa, että Arnicalla hoidetut eläimet, joilla oli myöhäistä turvotusta (myöhäinen alaryhmä), ovat siirtyneet lähtötasolle muihin ryhmiin nähden.

(a)

(b)

(a)
(b)

Kuva 6

Sirontakuvio, joka osoittaa turvotusaikojen erilaiset kehityssuunnat molempien alaryhmien välillä. Valkoiset pisteet edustavat kontrollia, mustat pisteet Arnica montana 6cH:ta ja harmaat pisteet deksametasonia. Kussakin kuvaajassa -akseli osoittaa turvotusta 30 minuuttia ennen karrageeni-injektiota ja -akseli turvotusta kokeen lopussa. LATE = myöhäinen turvotuksen alaryhmä; EARLY = varhainen turvotuksen alaryhmä.

4. Pohdinta

Homeopaattisista lääkkeistä, jotka ovat erityisen kiinnostavia tulehduksen hallinnassa , Arnica montana on yksi tutkituimmista. Kuitenkin viimeaikaisessa homeopatiaa koskevassa tieteellisessä kirjallisuudessa on monia tutkimuksia, joissa pyritään osoittamaan sen vaikutuksen tehokkuus, mutta vain harvat teokset on omistettu kudosten fysiopatologisten muutosten ymmärtämiselle sen jälkeen, kun eläimet on altistettu näille lääkkeille . Tästä näkökulmasta käsillä oleva työ rakennettiin; tulehtuneen sidekudoksen yksityiskohtaisen tutkimuksen avulla, ottaen huomioon siihen siirtyvien solujen alaryhmät, alusten käyttäytymisen ja tämän prosessin ajasta riippuvan dynamiikan Arnica montana 6cH:n vaikutuksen alaisena. Mielenkiintoista on, että jotkin havaitut vaikutukset ovat aiempien havaittujen tulosten mukaisia, kuten imusuonten avautuminen ja siitä seuraava turvotuksen väheneminen .

Tässä saadut ensimmäiset tulokset viittaavat mielenkiintoiseen tosiasiaan: kunkin alaryhmän yksilöllinen analyysi osoittaa ajallisuuden merkityksen Arnica montana 6cH:n vaikutuksessa; eläimet, jotka esittivät spontaania myöhäistä turvotuksen huipentumaa (30 minuuttia ärsytystä aiheuttavan ruiskutuksen jälkeen), olivat herkempiä Arnica-valmisteelle kuin eläimet, jotka esittivät varhaista turvotuksen huippupistemäärää (30 minuuttia ennen). Tässä tapauksessa turvotus oli jopa vähemmän voimakasta kuin kontrolli- ja deksametasonilla käsitellyissä ryhmissä, ja tämä seikka liittyi mastosolujen degranulaation merkittävään vähenemiseen ja imusuonten halkaisijan kasvuun. Molemmat ilmiöt voivat vaikuttaa makroskooppisen turvotuksen vähenemiseen, ja ne eroavat deksametasonikuviosta, jossa imusuonten pinta-ala pienenee passiivisesti yhdessä turvotuksen vähenemisen kanssa, kuten kuvassa 2 on esitetty. Tämä vaikutus vahvistaa aiemmin havaitut tulokset .

Karrageeni on merilevästä Chondrus crispus saatu polysakkaridi, jolla on kyky aiheuttaa paikallista tulehdusta ilman systeemisiä vaikutuksia . Klassisesti tiedetään, että prostaglandiinit syntyvät ihonalaisen karrageeni-injektion jälkeisen turvotuksen muodostumisen aikana migroituneista neutrofiileistä . Arnica montana 6cH:n turvotusta ehkäisevän vaikutuksen havaitseminen yksinomaan eläimillä, joilla esiintyi akuutin tulehduksen myöhäistä mallia, viittaa erilaisten kemiallisten välittäjäaineiden osallistumiseen kontrolloiviin reitteihin, kuten aiemmin on osoitettu . Tässä mielessä histamiini ja prostaglandiini, välittäjäaineet, joiden vaikutushuippu ajoittuu 15-30 minuuttiin, todennäköisesti muokkaavat tätä prosessia myöhäisessä turvotuksen alaryhmässä sellaisten välittäjäaineiden sijasta, joilla on hyvin varhainen vaikutus, kuten bradykiniini, jonka vaikutushuippu ajoittuu noin 10 minuutin päähän laukeamisesta .

Kokeelliset mallit, jotka on suunniteltu erityisesti osoittamaan yksilöllisen vaihtelun merkitystä homeopaattisen lääkkeen vaikutuksessa, on kuvattu jo aiemmin , mutta ei koskaan tulehdusprotokollaa varten. Yksilöllisyys tarkoittaa spesifisyyttä homeopaattisessa lääkkeessä; Rocha 2008 , vain luonnostaan hyperaktiiviset rotat olivat vastuussa Rhus toxicodendron 200cH -hoidosta, mitä tulee niiden käyttäytymiseen avoimen kentän laitteessa. Toisaalta Soares 2007 havaitsi, että vain hypoaktiiviset rotat olivat vastuussa Bryonia alba 200cH -hoidosta. Nämä toisiaan täydentävät tutkimukset osoittavat tuloksia, jotka ovat yhteensopivia asianomaisen materia medican kanssa. Molempien tutkimusten ja muiden tutkimusten systemaattinen vertailu on nähtävissä osoitteessa .

PMN:n ja mononukleaaristen leukosyyttien alatyyppien solumigraation osalta ei havaittu eroa ryhmien ja alaryhmien välillä, eikä CD163+ / MAC387+ -suhde paljastanut muutosta makrofagien kypsymisen dynamiikassa tulehduskohdassa. CD 163 on 175 kD:n transmembraaninen I-tyypin glykoproteiini, joka tunnetaan myös nimellä ED2-proteiini. Sen esiintyminen on kuvattu kypsän makrofagin pinnalla, mutta myös vähemmän voimakkaana kypsymättömissä monosyyteissä ja muissa mononukleaarisissa soluissa ihmisillä. ED 2:n ilmentyminen liittyy rauta-aineenvaihduntaan, ja se lisääntyy tulehduksen myöhemmissä vaiheissa, koska positiivisilla soluilla on moduloiva rooli, sillä ne vapauttavat autokriinistä IL10:tä. T- ja B-lymfosyyttien läsnäolo tulehduskohdassa voisi liittyä tiettyyn modulaattorivaikutukseen , jota on ehdotettu aiemmissa Arnica montana 6cH:ta koskevissa tutkimuksissa, mutta jota ei ole vahvistettu tässä.

Adheesiomolekyylien CD 54 (ICAM-1) ilmentyminen oli suurempaa Arnica montana 6cH:lla hoidetuissa eläimissä, joilla esiintyi varhaista tulehduskuviota, ja se liittyi suurempaan prosentuaaliseen osuuteen degranuloituneista mastiittihäntäsoluista tulehtuneessa kudoksessa mutta ei suurempaan leukosyyttien siirtymiseen. Vaikka mekanistista selitystä ei voitu tehdä tutkimuksen tässä vaiheessa, näyttää siltä, että kokonaistulokset jakautuvat kahteen pääkuvioon: verisuonten dynamiikan säätelyyn, mikä on ilmeistä myöhäisessä turvotuksen alaryhmässä, ja solutapahtumien säätelyyn, mikä on ilmeistä varhaisessa turvotuksen alaryhmässä, mikä viittaa siihen, että Arnica montana 6cH:n vaikutuksesta on mahdollista säätää yksilöstä riippuvaisesti verisuonten ja solujen muodostamien tulehdustapahtumien laatua, kuten kuvassa 6 on esitetty. Nämä erilaiset vaihtelumallit, jotka vaihtelevat testatun biologisen järjestelmän aikaisemman tilan mukaan, on kuvattu kokeellisesti muissa kokeellisissa yhteyksissä erilaisilla homeopaattisilla valmisteilla .

Johtopäätöksenä voidaan korostaa kahta ehdotettua hypoteesia: (a) Arnica montana 6cH -hoidolla ei ole leukosyyttien alaryhmien migraation valikoivaa modulaatiota, vaan ainoastaan verisuonten säätelyä lymfaattisen imeytymisen, CD54:n ilmentymisen ja histamiinin degranulaation osalta, ja (b) yksilöllinen kineettinen vaihtelu verisuonitapahtumissa häiritsee selvästi Arnica montana 6cH -hoidon jälkeen.

Eturistiriidat

Työhön ei liity eturistiriitoja.

Kiitokset

Tekijät kiittävät CAPES-PROSUP-ohjelmaa ja FAPESP Proc. no. 2007/59661-5 taloudellisesta tuesta; Marcia Gutierrez Farmacia Sensitivasta lääkkeiden toimittamisesta; Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato ja Lika Osugui teknisestä tuesta.