- Abstract
- 1. Bevezetés
- 2. Módszerek
- 2.1. A vizsgálat dózis-skálázása
- 2.2. A vizsgálatban résztvevők
- 2.3. Eredménymérések
- 2.4. Gomba hatóanyag
- 2.5. Immunológiai rohamok
- 2.5.1. Teljes vérkép differenciáldiagnosztikával
- 2.5.2. Természetes gyilkos sejtek funkcionális aktivitása
- 2.5.3. Immunfenotipizálás PBMC szubszettek
- 2.6. A sejteket hideg PBS-ben mossuk. Klinikai vizsgálati protokoll
- 3. Eredmények
- 3.1. Mellékhatások
- 3.2. Immunválasz
- 4. ábra. Megbeszélés
- Etikai jóváhagyás
- Érdekellentét
- Köszönet
Abstract
Introduction. A Trametes versicolor (Tv) gombából szájon át beadott készítményekről feltételezték, hogy javítják az immunválaszt emlőrákos nőknél a standard kemoterápiát és sugárterápiát követően. Módszerek. Egy I. fázisú, két központban végzett, dózisnövelő vizsgálatot végeztek a Tv-készítmény maximálisan tolerálható dózisának meghatározására, amikor a sugárterápia befejezése után 6 héten át naponta osztott adagokban szedték. Tizenegy résztvevőt toboroztak, és kilenc nő fejezte be a vizsgálatot. Minden kohorsz három résztvevőből állt, akik három Tv-dózis (3, 6 vagy 9 gramm) egyikét kapták. Az immunológiai adatokat a sugárkezelés előtt és után, 3 kezelési időpontban és egy 3 hetes kimosást követően gyűjtötték. Eredmények. Kilenc nemkívánatos eseményt jelentettek (7 enyhe, 1 közepes és 1 súlyos), ami arra utal, hogy a Tv jól tolerálható volt. Az immunológiai eredmények a következő tendenciákat mutatták: (1) a limfociták számának növekedése 6 és 9 gramm/nap; (2) a természetes ölősejtek funkcionális aktivitásának növekedése 6 gramm/nap; (3) a CD8+ T-sejtek és a CD19+ B-sejtek dózisfüggő növekedése, de nem a CD4+ T-sejtek vagy a CD16+56+ NK-sejteké. Következtetés. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a Tv-készítmény legfeljebb 9 gramm/nap adagja biztonságos és tolerálható emlőrákos nőknél a primer kezelés utáni környezetben. Ez a Tv-készítmény javíthatja az immunstátuszt immunhiányos emlőrákos betegeknél a standard primer onkológiai kezelést követően.
1. Bevezetés
A Trametes versicolor (Tv), más néven Coriolus versicolor, közismert nevén pulykafarok, egy olyan gombafaj, amelyből olyan készítményeket készítettek, amelyeket régóta használnak a hagyományos ázsiai gyógyászatban . Két proteoglikán frakció, a poliszacharid-K (PSK) és a poliszacharid-peptid (PSP) a Tv hasonló forró vizes kivonatai, amelyekről rákellenes aktivitást jelentettek . Japánban a PSK-t rutinszerűen írják fel a rákos betegeknek, mind a sugárkezelés és a kemoterápia alatt és után . Az USA-ban számos természetgyógyász orvos és integratív onkológus (MD) körében is bevett gyakorlat, hogy egész, fagyasztva szárított Tv-t írnak fel mellrákos betegeknek . A feltételezések szerint a Tv immunológiai aktivitása a fő mögöttes mechanizmus, amely felelős a daganatellenes hatásaiért, valamint a túlélési arányokra gyakorolt hatásáért. A Trametes versicolor hatásmechanizmusa magában foglalja mind a veleszületett, mind az adaptív immunválaszok fokozását, legalábbis részben a Toll-szerű 2 receptor agonista aktivitásán keresztül . Preklinikai állatkísérletek és előzetes klinikai adatok alátámasztják azt a hipotézist, hogy a Tv-származékok előnyösek lehetnek mind az ösztrogénreceptor negatív, mind a pozitív daganatok kezelésében a kezelés immunológiai depresszív hatásainak enyhítése és a betegségmentes túlélés fokozása révén az immunológiai felügyelet fokozása és a tumorantigén-tolerancia legyőzése révén .
Az immunológiai tényezőknek az emlőrák kezelése által történő befolyásolásának megértése ígéretes területeket javasol a daganatellenes immunválaszok erősítését célzó kiegészítő terápiák kifejlesztésében. A legújabb adatok azt mutatják, hogy a kemoterápiás gyógyszerek bizonyos osztályai immunogén tumorsejtpusztulást okoznak, ami az antigén keresztprezentáció fokozódásához és a tumorellenes immunválasz stimulálásához vezet. Bizonyítékok arra utalnak, hogy az NK-sejtek fontos szerepet játszanak mind a korai, mind az áttétes emlőrák megelőzésében . Egyes emlőrákos betegekről beszámoltak, akiknél hiányzik az NK-sejtek aktivitása a K562 célsejtekkel szemben . A jelenlegi adatok arra utalnak, hogy a műtéten, kemoterápián és sugárterápián átesett emlőrákos betegek immunológiai deficitben szenvednek . Andersen és munkatársai arról számoltak be, hogy az emlőrákos betegek stressz-szintje szignifikánsan előre jelezte az alacsonyabb NK-sejt-lízist, valamint a perifériás vér limfocitáira adott csökkent proliferatív választ . Korábbi megfigyelési vizsgálatunk megerősítette, hogy a lymphopenia és az alacsony NK sejtaktivitás a sugárterápia befejezését követő 6 hét alatt végig jelen volt .
A Trametes versicolor potenciális előnyeinek jobb megértéséhez az emlőrákos nőknél szükség volt egy dózis eszkalációs vizsgálatra a biztonságosság és tolerálhatóság értékelésére. Ennek érdekében a Minnesotai Egyetem és a Bastyr Egyetem multidiszciplináris csapata elvégezte az 1. fázisú dózis eszkalációs vizsgálatot, hogy meghatározza a Tv biztonságosságát és maximálisan tolerálható dózisát olyan emlőrákkal diagnosztizált nőknél, akik emlőrák miatt standard kezelésen estek át, és hajlandóak voltak részt venni egy kilenchetes vizsgálatban a sugárterápiát követően.
2. Módszerek
2.1. A vizsgálat dózis-skálázása
Szokásos 1. fázisú elrendezést alkalmaztak, dózisszintenként 3 vizsgálati alannyal az MTD (maximálisan tolerálható dózis) eléréséig. A dózis eszkalációs séma minden kohorszban a Tv 3 gm (a leggyakrabban alkalmazott dózis); 6 gm; 9 gm; 12 gm; 18 gm; 24 gm volt. Ez a vizsgálat csak a kilenc grammos kohorszon keresztül toborzott (𝑁=9).
2.2. A vizsgálatban résztvevők
A vizsgálatban részt vevő 21 és 75 év közötti, I., II. vagy III. stádiumú emlőrákkal diagnosztizált, műtéten és kemoterápián átesett, sugárterápia megkezdésére kész nők írásbeli beleegyezésüket követően vettek részt a vizsgálatban. A részvételhez hozzátartozott az is, hogy a vizsgálat során hajlandóak voltak következetes étrendet tartani, és a sugárterápia alatt és a vizsgálat befejezéséig kerülniük kellett az immunmoduláló hatású gombák és egyéb növényi termékek étrendi forrásait. A vizsgálatba való bekapcsolódás előtt normális határértékeken belüli alapvérzés-, vese- és májfunkciókra volt szükség. A vizsgálatot a Minnesotai Egyetem Rákközpontjában (Minneapolis, Minnesota) és a Bastyr Egyetemen (Ken more, Washington) végezték. A vizsgálatot a Minnesotai Egyetem és a Bastyr Egyetem IRB-bizottságai jóváhagyták. 2008 januárja és 2010 júniusa között tizenegy I-III. stádiumú emlőrákban szenvedő nő felelt meg a vizsgálat szűkített kritériumainak, beleegyezett a részvételbe, és a legalacsonyabb dózisú kohorszból egymás után vették fel őket. A 3 gm, 6 gm és 9 gm kohorszok mindegyikében három résztvevő fejezte be a vizsgálatot. A résztvevők közül ketten a második látogatás után visszaléptek a vizsgálatból, mert a klinikára való eljutás nehézségekbe ütközött. A vizsgálatot befejező kilenc nő jellemzői a következők voltak: 38 és 68 év közötti életkor; hat ER-negatív és három ER-pozitív; három I. stádiumú; két II. stádiumú és négy III. stádiumú emlőrák. A vizsgálatot befejező nők közül egy nő nem részesült kemoterápiában a besugárzást megelőzően, és az IRB-nek jelentették az alkalmassági protokoll megsértését.
2.3. Eredménymérések
A vizsgálat elsődleges célja a Trametes versicolor biztonságosságának és tolerálhatóságának értékelése volt emlőrákos nőknél a sugárterápia utáni környezetben. A dózisnövelő vizsgálat kilenc résztvevőjét klinikai és laboratóriumi módszerekkel, valamint a dóziskorlátozó toxicitás (DLT) kritériumai alapján nyomon követték a nemkívánatos események (AE-k) tekintetében, amelyet a kezeléssel kapcsolatos bármely 2. vagy annál magasabb fokú toxicitásként határoztak meg, az NCI Common Terminology Criteria for Adverse Events V 3.0 (CTCAE) alapján pontozva. A nőket hetente ellenőrizték a nemkívánatos eseményeket a készítmény alkalmazása során, vagy a klinikai látogatáson, vagy a látogatások közötti telefonos szűrésen. A másodlagos cél olyan előzetes adatok gyűjtése volt, amelyek összehasonlították a sugárterápia előtti és utáni alapszinteket, a kezelés alatti és utáni immunológiai méréseket, beleértve a teljes vérképet differenciáldiagnosztikával, a természetes ölősejtek (NK) aktivitását, a T szabályozó sejtek vizsgálatát, a T/B/NK sejtalcsoport vizsgálatát, a fagocita indexet és a citokinszinteket. A statisztikai elemzést, beleértve a független mintás t-teszteket és az egyirányú ANOVA-t Turkey post hoc többszörös összehasonlítással, a GraphPad Prism 5.04-es verziójával (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA) végeztük. A teljesítmény és a mintanagyság növelése érdekében a központjaink által 2006 óta végzett megfigyeléses vizsgálat (𝑁=14) adatait kombinálták a jelenlegi dózis eszkalációs vizsgálattal (𝑁=9). A részvételi kritériumok mindkét vizsgálatban azonosak voltak (𝑁=23).
2.4. Gomba hatóanyag
A Trametes versicolor fagyasztva szárított micéliumpor Paul Stamets-től (Fungi Perfecti, Inc., Olympia, WA) származott, és a Beehive Botanicals (Hayward, WI) kapszulázta. Minden kapszula 500 mg terméket tartalmazott. Az FDA IND jóváhagyása (# 75,405) 2007-ben történt.
2.5. Immunológiai rohamok
2.5.1. Teljes vérkép differenciáldiagnosztikával
A klinikai laboratóriumi vizsgálatokat (CBC, kémia, szérum terhességi tesztek és vizeletvizsgálat) a Washington Egyetem Laboratóriumi Orvostudományi Tanszékén végezték a Bastyr Egyetem telephelyén toborzott résztvevők esetében és a Minnesotai Egyetem Fairview Diagnosztikai Laboratóriumában a Minnesotai Egyetem telephelyén toborzott résztvevők esetében.
2.5.2. Természetes gyilkos sejtek funkcionális aktivitása
A mért immunsejt alcsoportok közé tartozott az NK sejtek aktivitása, a T szabályozó sejtek vizsgálata, a T/B/NK sejt alcsoport vizsgálata, a fagocita index és a citokinszintek. Az immunológiai vizsgálatokat a Bastyr Egyetem laboratóriumában végezték mindkét helyszínről toborzott alanyok esetében. A Minnesotai Egyetem Általános Klinikai Kutatóközpontjában (GCRC) gyűjtött vért egy éjszaka alatt szállították a Bastyr Egyetemre. A Minnesotai Egyetemről a Bastyrba szállított vér minőségét a következő kritériumok alapján értékelték. A Bastyr laboratóriumba érkezéskor 48 óránál idősebb minták esetében a limfocitákat izolálták, és a sejtek életképességét trypan-kék festéssel határozták meg. Ha az életképesség 80%-nál nagyobb volt, a vizsgálatot elvégezték. Ha az életképesség 80%-nál kisebb volt, a mintákat visszautasították. A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC-k) Ficoll-Hypaque gradiens segítségével izoláltuk (sűrűség = 1,070 g/ml), kétszer mostuk PBS-ben, és RPMI 1640-ben, 10% FBS-ben, 2 mM L-Gln és penicillin-streptomicin (1000 U/ml; 1 mg/ml) mellett tartottuk. E PBMC-minták NK-sejt-aktivitását, a K562 tumoros célsejtek elpusztításának képességével mérve, három példányban értékeltük 50 : 1, 25 : 1 és 12,5 : 1 effector/célsejt (E : T) arányban, a publikált módszerek szerint. A célsejteket 3,3′-dioctadecyloxacarbocyanin perkloráttal (DiOC18) jelöltük, és PBMC effektorsejtekkel együtt tenyésztettük négy órán keresztül. A spontán célsejtpusztulás meghatározásához egy csak K562 sejteket tartalmazó kontrollmintát is bevontunk. Az inkubációt követően propidium-jodidot adtunk az elhalt sejtek kimutatására. Az elpusztult célsejtek százalékos arányát úgy határoztuk meg, hogy a spontán lízis százalékos arányát kivontuk az adott E : T arányából. A standardizált NK-sejt-aktivitás ábrázolásához a lítikus egységeket egy korábban közzétett és validált szoftverprogrammal számoltuk ki a következő paraméterek felhasználásával: célpont per lyuk = 10 000; LU per sejtszám = 107; görbe maximuma = 48; százalékos lízis = 20 . Az LU20 értékek, amelyeket az E : T arány, amelynél a célsejtek 20%-a elpusztul, a PSL és a log E közötti dózis-válasz görbékből extrapoláltuk: T-arányt az egyes vizsgált vérminták esetében .
2.5.3. Immunfenotipizálás PBMC szubszettek
PBMC szuszpenziókat (5×105 sejt) 3 csőbe tettünk, PBS-ben mostuk, lecsévéltük, a felülúszókat kalózként lecsévéltük és a sejtpelleteket 100 μL PBS-ben reszuszpendáltuk. Az 1. csőben lévő PBMC-ket CD3-PC5, CD4-PE és CD8-FITC-vel festettük; 2. cső: CD3-PC5, CD16-FITC és CD56-PE; 3. cső: CD14-PC5. A csöveket rövid ideig vortexeltük, lefedtük és 15 percig jégen inkubáltuk, majd a sejteket kétszer hideg PBS-ben mostuk, 0,5 ml-re reszuszpendáltuk PBS-ben, és a PBMC-alcsoportok százalékos arányát áramlási citometriás elemzéssel határoztuk meg Beckman Coulter FC500 és CXP szoftver segítségével.
2.6. A sejteket hideg PBS-ben mossuk. Klinikai vizsgálati protokoll
A vizsgálat időtartama kilenc hét volt, és a sugárterápia befejezése után kezdődött. Hat hét termékhasználatot tartalmazott, amelyet egy háromhetes, termékhasználat nélküli mosási időszak követett (1. ábra). A betegeket a kemoterápia befejezése után és a sugárterápia megkezdése előtt szűrték ki és állapították meg, hogy alkalmasak a vizsgálatra. A vizsgálat hat látogatást igényelt a klinikai kutatóközpontokban. Az első vizsgálati látogatásra a sugárterápia megkezdése előtt került sor, amikor is a kiindulási laboratóriumi eredményeket vették fel. A sugárkezelés befejezését követő első héten belül a résztvevők a második látogatáson vettek részt, amikor is elvégezték a laborvizsgálatokat, és megkezdődött a kilenchetes vizsgálat. A résztvevők hat hétig kaptak Tv terméket, majd két hét különbséggel visszatértek a kutatóközpontba a harmadik, negyedik és ötödik látogatásra a laboratóriumi vizsgálatokra, valamint a termék tolerálhatóságának és a mellékhatások értékelésére. Az utolsó (hatodik) látogatásra kilenc hét múlva került sor, három hét termékszünetet követően, az utolsó laborvizsgálat és az esetleges elhúzódó mellékhatások értékelése céljából.
Az I. fázis dóziskalibrációs vizsgálati protokollja.
A dózis eszkalációs protokollban legalább három résztvevőből álló kohorszok szájon át szedtek Tv-t osztott dózisban naponta hat héten keresztül. Az első dóziskohorsz 3 gramm/napot vett be két osztott adagban; a második kohorsz 6 gramm/napot vett be két osztott adagban; a harmadik kohorsz 9 gramm/napot vett be három osztott adagban. A napi három gramm a természetgyógyászati gyakorlatban leggyakrabban alkalmazott adag, Japánban pedig 9 grammot is alkalmaznak. A vizsgálat célja a biztonságosságot és tolerálhatóságot igazoló maximális tolerálható dózis (MTD) meghatározása volt (1. táblázat).
|
|||||||||||||||||||||
3. Eredmények
3.1. Mellékhatások
A dózis eszkalációs vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy a Tv-készítmény legfeljebb 9 gramm/nap adagja jól tolerálható volt emlőrákos nőknél hat héten keresztül a sugárkezelés utáni kezelésben. Kilenc mellékhatás fordult elő; hét enyhe, egy közepes, és csak egy 3. fokozatú mellékhatás, amely egy résztvevőnél szorongásos roham volt, amely valószínűleg nem függött össze a vizsgált gyógyszerrel (2. táblázat). Az egyéb jelentett enyhe mellékhatások közé tartozott az átmeneti szívégés, szívdobogás, székrekedés, mellkasi fájdalom, láz, sugárfertőzéses bőrgyulladás és megfázás/influenza tünetei. Mindhárom dózis jól tolerálható volt, és a résztvevőknek nem okozott nehézséget a napi háromszor 9 kapszula lenyelése. Figyelemre méltó, hogy sem hányingerről, sem emésztőrendszeri zavarokról nem számoltak be; más Tv-kivonatokkal végzett korábbi klinikai vizsgálatok során két mellékhatásról számoltak be.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3.2. Immunválasz
A vörösvérsejt-tartományt nem befolyásolta sem a sugárterápia (RT), sem a Tv beadása. Az abszolút vörösvérsejtszám, a hemoglobin és a hematokrit normális volt az első látogatáskor, azaz a RT megkezdése előtti napon, és a vizsgálat hátralévő részében továbbra is a normális határértékeken belül maradt. Az abszolút fehérvérsejtszám és a neutrofilek száma általában minden nőnél a normál határértékeken belül volt mind a RT előtt és után, mind a RT utáni hetekben, amíg Tv-t szedtek (az adatok nem láthatóak). Az abszolút limfocitaszám azonban a többi CBC-alcsoporttól eltérő mintázatot mutatott. Mivel a részvételi kritériumok azonosak voltak a központjaink által 2006 óta végzett vizsgálatokban, a teljesítmény növelése érdekében kombináltuk a megfigyeléses vizsgálatunk (𝑁=14) adatait (𝑁=14), amely kimutatta, hogy a RT immunhiányt okozott az I-III. stádiumú emlőrákban szenvedő nőknél, a jelenlegi dózis eszkalációs vizsgálatunkkal (𝑁=9). A két vizsgálatban együttesen 23 olyan nő esetében, akik az emlőműtét és kemoterápia után I-III. stádiumú emlőrák státuszban voltak, majd sugárterápiában részesültek, a limfociták az RT előtt a normál határértékeken belül voltak, de az RT után kórosan alacsony szintre csökkentek. A limfociták átlagos száma mind a 23 alany esetében 1,027±0,298 volt a RT előtt, és 20%-kal csökkent a RT után 0,681±0,254-re, ami statisztikailag szignifikáns különbség volt . A dózis eszkalációs vizsgálatban a Tv két magasabb orális dózisa (6 és 9 g) a nyiroksejtek számának korábbi helyreállását eredményezte (2. ábra). A megfigyelt csoportban a limfociták száma fokozatosan helyreállt, de az átlagos limfocitaszám a 6 és 9 g-os Tv-kohorszoké alatt maradt az RT-t követő 6 hétben. Az egyes dóziskohorszok kis száma miatt (𝑁=3) csak a megfigyelő és a 9 g-os csoport között találtunk statisztikai szignifikanciát a sugárterápia utáni 2 hetes időpontban. A sugárterápia statisztikailag szignifikánsan csökkentette a limfociták abszolút számát a műtéten és kemoterápián átesett I-III. stádiumú emlőrákban szenvedő nőknél (lásd a 2. ábrát).
A természetes ölősejtek funkcionális aktivitása drámaian csökkent a pre- a terápia utánra mind a 23 emlőrákos beteg esetében, akik vagy a megfigyeléses vizsgálat (𝑁=14) vagy a dózis eszkalációs vizsgálat (𝑁=9) első két látogatását elvégezték. A 3. ábra azt mutatja, hogy az átlagos NK-sejtaktivitás 19,941±18,959 volt az RT előtt, és 9,872±13,454-re csökkent az RT után (𝑁=23). Ez a csökkenés statisztikailag szignifikáns volt (𝑡(44)=2,077, 𝑃=0,043). A 6 g Tv-dózisú kohorszban az NK-sejtek aktivitásának növekedése felé mutató tendencia volt megfigyelhető.
A sugárkezelés statisztikailag jelentősen csökkentette az LU által reprezentált NK-sejtfunkciót, amelyet a 107 osztott dózisok LU20-val való osztásával számítottunk. Az LU20 az effektorsejtek (NK) száma, amely a célsejtek (K562) 20%-os specifikus lizálásának eléréséhez szükséges. Ezért minél kisebb az LU20, annál hatékonyabbak az NK-sejtek. Ennek az eredménynek az értelmezése nehéz lehetett az egyének eltérő válaszai miatt a gombapótlásra. Az NK-sejtek aktivitásának átmeneti növekedésének tendenciáját a 6 g-os dóziscsoportban figyeltük meg (lásd a 3. ábrát).
A sugárterápia és a Tv-adagolás T-, B- és NK-sejt-populációkra gyakorolt hatását is megmértük azon kilenc betegnél, akik befejezték az I. fázisú dózis eszkalációs vizsgálatot. A WBC és az áramlási citometriás immunfenotipizálási adatokból kiszámítottuk az abszolút értéket (mm3). A sugárterápia nem volt szignifikáns hatással a CD4+ és CD8+ T-sejt, CD19+ B-sejt és CD16+/56+ NK-sejt populációkra. Mivel a megfigyeléses vizsgálatban nem végeztek immunfenotipizálást, az összetett (besugárzás előtti és utáni) pontszámok számai azoké voltak, akik részt vettek a dózis eszkalációs vizsgálatban (𝑁=9). A CD8+ T-sejtek száma statisztikailag nem különbözött a sugárkezelés előtt és után (4. ábra). Azonban a CD8+ T-sejtek és a CD19+ B-sejtek számának növekedése volt megfigyelhető a perifériás vérben a Tv-kiegészítő csoportokban. A CD8+ T-sejtek száma a 9 hetes dózis eszkalációs vizsgálat során a 9 g Tv-dózisú kohorszban mind a 3 g-os, mind a 6 g-os csoporthoz képest megnövekedett. Egyirányú ANOVA-t használtunk az adagolási csoportok közötti általános különbség elemzésére a kezelési időszak (2-4-6 hét) során. Ez kimutatta a CD8+ citotoxikus T-sejtek statisztikailag szignifikáns növekedését a 9 g-os csoport esetében mind a 3 g-os, mind a 6 g-os csoporthoz képest (𝐹(2,6)=42,04, 𝑃=0,0003). A 3 g-os és a 6 g-os csoport közötti különbség nem volt szignifikáns (lásd a 4. ábrát).
A nyolc dózisemelést végző résztvevő összetett pontszámai szerint a sugárkezelés nem változtatta meg jelentősen a B-sejtek számát (5. ábra). A Tv beadása azonban a CD19+ B-sejtek számának növekedésével járt együtt. Egyirányú ANOVA-t használtunk a dóziscsoportok közötti általános különbség elemzésére a kezelési időszak (2-4-6 hét) során. Ez kimutatta a CD19+ B-sejtek statisztikailag szignifikáns növekedését a 6 g-os dóziscsoport esetében a 3 g-os csoporthoz képest . A 3 g-os és a 9 g-os csoport, valamint a 6 g-os és a 9 g-os csoport közötti különbség nem volt szignifikáns (lásd az 5. ábrát).
A CD16+56+ NK-sejtek számát tekintve sem a sugárkezelés, sem a Tv adagolása miatt nem észleltünk szignifikáns változásokat (6. ábra). Mivel az NK-sejtek aktivitását mind a RT csökkentette, mind a 6 grammos Tv-dózisú kohorszban növelte (3. ábra), de úgy tűnt, hogy az NK-sejt-populációkat ezek a kezelések nem befolyásolták jelentősen, az adatok arra utalnak, hogy az NK-sejtek aktivitásának fokozódása nem az NK-sejtek számában bekövetkező, kezelés okozta változásoknak köszönhető. Az NK-sejt-populációt sem a sugárkezelés, sem a Tv orális dózisai nem befolyásolták (lásd a 6. ábrát).
4. ábra. Megbeszélés
A vizsgálat eredményei megállapítják a Trametes versicolor (Tv) készítmény szájon át történő adagolásának biztonságosságát 3, 6 és 9 grammos dózisban, a terápia súlyos mellékhatásai nélkül az emlőrák sugárkezelését követő nőknél. A jelenlegi vizsgálat megerősíti korábbi jelentésünket, miszerint az emlőrák standard mellkasi sugárterápiája nem befolyásolja a vörösvértesteket vagy a neutrofileket, de specifikus immunhiányt idéz elő, beleértve a lymphopeniát és a csökkent NK-sejt funkcionális aktivitást . Az NK-sejtes terápiák világszerte ígéretes rákellenes kezelésekként jelennek meg, kihasználva az NK effektorok gyors citolitikus hatását és potenciálisan széles körű alkalmazhatóságukat a rosszindulatú daganatok széles skálája ellen . Új eredményünk, hogy az NK-sejtek aktivitásának csökkenése független az NK-sejtek számától. Itt azt mutatjuk be, hogy az RT csökkenti az egy NK-sejtre jutó NK-sejt-aktivitást. A Tv nagyobb, 6 és 9 gramm/nap orális dózisai a limfociták és az NK-sejtek aktivitásának gyorsabb helyreállásával, valamint a CD8+T sejtek és a CD19+ B sejtek számának növekedésével jártak együtt. A Tv-nek nem volt nyilvánvaló hatása a CD 16+/56+ NK-sejtek számára, csak a funkcionális aktivitásukra. Bár tendencia mutatkozik arra, hogy a magasabb Tv-dózisok kifejezettebb immunológiai aktivitást mutatnak, ezt az I. fázisú dózis-eszkalációs vizsgálatot nem az immunmarkerek dózisfüggő változásainak értékelésére tervezték. A dóziskohorsz-csoportonként 3 emlőrákos betegből álló kis mintákkal nyert, dózisfüggő tendenciákat mutató előzetes adatok arra a tesztelhető hipotézisre vezetnek, hogy 6 gramm Tv gyorsabb immungyógyulást eredményezhet a sugárterápia után. Ennek az I. fázisú vizsgálatnak az eredményei igazolják, és olyan platformként szolgálnak, amely alapján a II. fázisú, randomizált, kontrollált, dózis-válasz vizsgálatokat lehet folytatni.
Bár ez a vizsgálat kimutatta a Trametes versicolor biztonságosságát a napi 9 grammos dózisig, a dózis eszkalációs vizsgálatot a maximálisan tolerálható dózis (MDT) értékelésére tervezték; ezért ez a vizsgálat nem határozta meg a biztonságosságot és tolerálhatóságot a legmagasabb dózisban. A nők toborzása a 12 grammos és magasabb kohorszba több korlátozó tényező miatt nem sikerült. Először is, a nőknek nagyon szigorú alkalmassági kritériumoknak kellett megfelelniük a vizsgálatba való bekerüléshez, és a kezelési protokolljukban műtéten, kemoterápián és sugárkezelésen kellett átesniük. Jelenleg sok mellrákdiagnózissal rendelkező nő nem kap hármas terápiás kezelést. Sok nőt 1-es stádiumú emlőrákkal diagnosztizálnak, és lumpektómián és sugárkezelésen esnek át, és ha az onkotípus pontszámuk alacsony, nem kapnak kemoterápiát. Ezenkívül sok nőt toboroztak más kutatási tanulmányokba, és elárasztották őket a további tanulmányokba való bekapcsolódásra irányuló kérésekkel. Ami a legfontosabb, azt tapasztaltuk, hogy a nők a hosszadalmas kemoterápiás és sugárkezelési kezelés befejezése után vonakodtak részt venni egy kilenchetes vizsgálatban, amely hat további látogatást igényelt az egyetemen.
Az I. fázisú adatok arra utalnak, hogy a Tv biztonságos immunterápia az emlőrákos betegek számára, amely korrigálhatja a sugárkezeléssel összefüggő immunhibákat. Eredményeink alapján a sugárterápia utáni időszakban szájon át alkalmazott Tv gombaterápia fokozhatja a nyiroksejtek számát és az NK-sejtek tumoricid aktivitását. Az elsődleges emlőrák-kezelés utáni visszaesés a veleszületett és adaptív immunrendszer hibáival állhat összefüggésben. A központunk által végzett kutatások továbbra is azt mutatják, hogy a Trametes versicolor egy újszerű immunterápiát képvisel, amely jelentős alkalmazásokkal rendelkezik a rákkezelésben.
Etikai jóváhagyás
Minden elvégzett kísérlet megfelel az USA hatályos törvényeinek.
Érdekellentét
A szerzők kijelentik, hogy nincs összeférhetetlenségük.
Köszönet
Ezt a munkát a National Institutes of Health/National Center for Complementary and Alternative Medicine (U19 AT 1998) és a Gateway for Cancer Research Grant no. G-04-002. A szerzők köszönik továbbá Rebekah Pratt szerkesztői támogatását az U of MN családorvosi tanszékéről, valamint Daniel Strenge közreműködését.