Phase 1 Clinical Trial of Trametes versicolor in Women with Breast Cancer

Abstract

Introduction. Suun kautta annettavien Trametes versicolor (Tv) -sienen valmisteiden on oletettu parantavan immuunivastetta rintasyöpää sairastavilla naisilla tavanomaisen kemo- ja sädehoidon jälkeen. Menetelmät. Vaiheen I kaksikeskuksinen annostutkimus tehtiin Tv-valmisteen suurimman siedetyn annoksen määrittämiseksi, kun sitä otettiin päivittäin jaettuina annoksina 6 viikon ajan äskettäin päättyneen sädehoidon jälkeen. Tutkimukseen rekrytoitiin yksitoista osallistujaa, ja yhdeksän naista suoritti tutkimuksen loppuun. Kussakin kohortissa oli kolme osallistujaa, jotka saivat yhden kolmesta Tv-annoksesta (3, 6 tai 9 grammaa). Immuunitiedot kerättiin ennen ja jälkeen sädehoidon, kolmena hoitoaikana ja kolmen viikon huuhtelun jälkeen. Tulokset. Haittavaikutuksia raportoitiin yhdeksän (7 lievää, 1 kohtalainen ja 1 vakava), mikä viittaa siihen, että Tv oli hyvin siedetty. Immunologiset tulokset osoittivat, että (1) lymfosyyttien määrä lisääntyi 6 ja 9 grammaa/vrk; (2) luonnollisten tappajasolujen toiminnallinen aktiivisuus lisääntyi 6 grammaa/vrk; (3) CD8+ T-solujen ja CD19+ B-solujen määrä lisääntyi annokseen nähden, mutta ei CD4+ T-solujen tai CD16+56+ NK-solujen. Päätelmät. Nämä tulokset osoittavat, että enintään 9 grammaa/vrk Tv-valmistetta on turvallista ja siedettävää rintasyöpää sairastaville naisille ensisijaisen hoidon jälkeisessä tilanteessa. Tämä Tv-valmiste voi parantaa immuunitilannetta immuunipuutteisilla rintasyöpäpotilailla tavanomaisen primaarisen onkologisen hoidon jälkeen.

1. Johdanto

Trametes versicolor (Tv), joka tunnetaan myös nimellä Coriolus versicolor ja jota yleisesti kutsutaan nimellä Turkey Tail (kalkkunanhäntä), on sienilaji, josta on valmistettu valmisteita, joilla on pitkä käyttöhistoria perinteisessä aasialaisessa lääketieteessä . Kaksi proteoglykaanifraktiota, polysakkaridi-K (PSK) ja polysakkaridi-peptidi (PSP), ovat samankaltaisia Tv:n kuumavesiuutteita, joilla on raportoitu olevan syöpää ehkäisevää vaikutusta . Japanissa PSK:ta määrätään syöpäpotilaille rutiininomaisesti sekä sädehoidon ja kemoterapian aikana että sen jälkeen . Myös monilla luontaislääkärillä ja integratiivisilla syöpälääkäreillä Yhdysvalloissa on yleinen käytäntö määrätä kokonaista, kylmäkuivattua Tv:tä rintasyöpäpotilaille . Tv:n immunologisen aktiivisuuden oletetaan olevan tärkein taustalla oleva mekanismi, joka on vastuussa sen kasvaimen vastaisista vaikutuksista sekä sen vaikutuksesta eloonjäämisasteeseen . Trametes versicolorin vaikutusmekanismiin kuuluu sekä synnynnäisten että adaptiivisten immuunivasteiden tehostaminen ainakin osittain Tollin kaltaisen 2-reseptorin agonistisen aktiivisuuden kautta . Prekliiniset eläinkokeet ja alustavat kliiniset tiedot tukevat hypoteesia, jonka mukaan Tv-johdannaiset voivat olla hyödyllisiä sekä estrogeenireseptorinegatiivisten että -positiivisten syöpien hoidossa lieventämällä hoidon immunologisia depressiivisiä vaikutuksia ja parantamalla tauditonta eloonjäämistä immunologisen valvonnan tehostamisen ja kasvainantigeenin toleranssin voittamisen kautta.

Ymmärtämällä, miten rintasyövän hoidot vaikuttavat immunologisiin tekijöihin, voidaan osoittaa, että on lupaavia alueita, joihin on keskityttävä kehitettäessä liitännäishoitoja, joilla pyritään vahvistamaan kasvaimen vastaisia immuunivasteita. Viimeaikaiset tiedot osoittavat, että tietyt kemoterapeuttisten lääkkeiden luokat aiheuttavat immunogeenisen kasvainsolukuoleman, joka johtaa antigeenien ristipresentaation tehostumiseen ja kasvaimen vastaisen immuunivasteen stimuloitumiseen. Todisteet viittaavat siihen, että NK-soluilla on tärkeä rooli sekä varhaisen että metastaattisen rintasyövän ehkäisyssä. Joillakin rintasyöpäpotilailla on raportoitu puuttuvan NK-solujen aktiivisuus K562-kohdesoluja vastaan . Nykyiset tiedot viittaavat siihen, että leikkauksen, kemoterapian ja sädehoidon läpikäyneillä rintasyöpäpotilailla on immunologinen vaje . Andersen ym. ovat raportoineet, että rintasyöpäpotilaiden stressitasot ennustivat merkittävästi heikompaa NK-solujen lyysiä sekä vähentynyttä proliferatiivista vastetta perifeerisen veren lymfosyytteihin . Aikaisempi tekemämme havainnointitutkimus vahvisti, että lymfopeniaa ja alhaista NK-solujen aktiivisuutta esiintyi koko 6 viikon ajan sädehoidon päättymisen jälkeen .

Jotta ymmärrettäisiin paremmin Trametes versicolor -valmisteen mahdollisia hyötyjä rintasyöpää sairastavilla naisilla, tarvittiin annoksen suurentamistutkimus turvallisuuden ja siedettävyyden arvioimiseksi. Tätä tarkoitusta varten Minnesotan yliopiston ja Bastyrin yliopiston monitieteinen työryhmä suoritti vaiheen 1 annoksen eskalaatiotutkimuksen määrittääkseen Tv:n turvallisuuden ja suurimman siedettävän annoksen rintasyöpädiagnoosin saaneilla naisilla, jotka olivat läpikäyneet rintasyövän tavanomaisen hoidon ja jotka olivat halukkaita osallistumaan yhdeksän viikon tutkimukseen sädehoidon jälkeen.

2. Menetelmät

2.1. Tutkimusmenetelmät. Tutkimuksen annosporrastus

Tutkimuksessa käytettiin tavanomaista vaiheen 1 suunnittelua, jossa annostasoa kohden oli 3 koehenkilöä, kunnes MTD (suurin siedetty annos) oli saavutettu. Tv-annoksen eskalaatiokaavio jokaisessa kohortissa oli 3 gm (yleisimmin käytetty annos); 6 gm; 9 gm; 12 gm; 18 gm; 24 gm. Tähän tutkimukseen rekrytoitiin vain yhdeksän gramman kohortin kautta (𝑁=9).

2.2. Tutkimukseen osallistujat

Tutkimukseen otettiin kirjallisen suostumuksen antamisen jälkeen 21-75-vuotiaita naisia, joilla oli diagnosoitu I-, II- tai III-vaiheen rintasyöpä ja jotka olivat läpikäyneet leikkauksen ja solunsalpaajahoidon ja olivat valmiita aloittamaan sädehoidon. Osallistumiskelpoisuuteen kuului myös halukkuus noudattaa johdonmukaista ruokavaliota koko tutkimuksen ajan ja välttää sieniä ja muita kasviperäisiä tuotteita, joilla on raportoitu olevan immunomoduloivia vaikutuksia, sädehoidon aikana ja tutkimuksen loppuun asti. Ennen tutkimukseen osallistumista edellytettiin, että hematologiset, munuaisten ja maksan peruselintoiminnot olivat normaaleissa rajoissa. Tutkimus suoritettiin Minnesotan yliopiston syöpäkeskuksessa Minneapolisissa, Minnesotassa ja Bastyrin yliopistossa Ken moreissa, Washingtonissa. Minnesotan yliopiston ja Bastyrin yliopiston IRB-komiteat hyväksyivät tutkimuksen. Tammikuun 2008 ja kesäkuun 2010 välisenä aikana yksitoista naista, joilla oli I-III-vaiheen rintasyöpä, täytti tämän tutkimuksen suppeat kriteerit, suostui osallistumaan tutkimukseen ja heidät otettiin mukaan peräkkäin pienimmän annoksen kohortista. Kolme osallistujaa kustakin 3 gm:n, 6 gm:n ja 9 gm:n kohortista suoritti tutkimuksen loppuun. Kaksi osallistujaa vetäytyi tutkimuksesta toisen tutkimuskäynnin jälkeen, koska heillä oli vaikeuksia kulkea klinikalle. Tutkimuksen loppuun saattaneiden yhdeksän naisen ominaisuudet olivat seuraavat: ikä vaihteli 38 ja 68 vuoden välillä, kuusi ER-negatiivista ja kolme ER-positiivista, kolme rintasyövän vaiheessa I, kaksi vaiheessa II ja neljä vaiheessa III. Yksi tutkimukseen osallistuneista naisista ei saanut kemoterapiaa ennen sädehoitoa, ja IRB:lle ilmoitettiin kelpoisuusprotokollan rikkomisesta.

2.3. Tulosmittarit

Tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena oli arvioida Trametes versicolor -valmisteen turvallisuutta ja siedettävyyttä rintasyöpää sairastavilla naisilla sädehoidon jälkeisessä tilanteessa. Annoksen suurentamistutkimuksen yhdeksää osallistujaa seurattiin haittatapahtumien (AE) osalta sekä kliinisin että laboratoriomenetelmin ja annosta rajoittavan toksisuuden (DLT) kriteerein, jotka määriteltiin asteen 2 tai sitä suuremmaksi hoitoon liittyväksi toksisuudeksi, joka pisteytettiin NCI:n haittatapahtumien yhteisten terminologiakriteerien V 3.0 (CTCAE) mukaisesti. Naiset seulottiin viikoittain haittatapahtumien varalta lääkkeen antamisen aikana joko klinikkakäynnin yhteydessä tai käyntien välillä puhelimitse. Toissijaisena tavoitteena oli kerätä alustavia tietoja, joissa verrattiin sädehoitoa edeltäviä ja sen jälkeisiä lähtötasoja, hoidon aikaisia ja sen jälkeisiä immunologisia mittauksia, mukaan lukien täydellinen verenkuva ja erotusarvot, luonnollisten tappajasolujen (NK-solujen) aktiivisuus, T-säätelysolujen määritys, T/B/NK-solujen osajoukkojen määritys, fagosyytti-indeksi ja sytokiinitasot. Tilastollinen analyysi, mukaan lukien riippumattomien otosten t-testit ja yksisuuntaiset ANOVA-analyysit, joissa on Turkey post hoc -moninkertainen vertailu, tehtiin GraphPad Prism -ohjelmalla, versio 5.04 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA). Tehon ja otoskoon lisäämiseksi keskuksissamme vuodesta 2006 lähtien tehdyn havainnointitutkimuksen (𝑁=14) tiedot yhdistettiin nykyiseen annoksen eskalointitutkimukseen (𝑁=9). Kelpoisuuskriteerit olivat samat molemmissa tutkimuksissa (𝑁=23).

2.4. Sienilääke

Trametes versicolor -pakastekuivattu myseelijauhe saatiin Paul Stametsilta Fungi Perfecti, Inc:stä, Olympia, WA, ja sen kapseloi Beehive Botanicals (Hayward, WI). Kukin kapseli sisälsi 500 mg tuotetta. FDA:n IND-hyväksyntä (# 75,405) saatiin vuonna 2007.

2.5. Immuunikohtaukset

2.5.1. Täydellinen verenkuva ja erotusarvot

Kliiniset laboratoriokokeet (CBC, kemia, seerumin raskaustestit ja virtsa) tehtiin Washingtonin yliopiston laboratoriolääketieteen laitoksella Bastyrin yliopiston toimipisteeseen rekrytoiduille osallistujille ja Minnesotan yliopiston Fairview Diagnostic Laboratory -laboratoriossa Minnesotan yliopiston toimipisteeseen rekrytoiduille osallistujille.

2.5.2. Verenkuva ja erotusarvot

2.5.2. Verenkuva ja erotusarvot. Luonnollisten tappajasolujen toiminnallinen aktiivisuus

Immuunisolujen osajoukkoa mitattiin muun muassa NK-solujen aktiivisuudella, T-säätelysolujen määrityksellä, T/B/NK-solujen osajoukon määrityksellä, fagosyytti-indeksillä ja sytokiinitasoilla. Immunologiset määritykset tehtiin Bastyrin yliopiston laboratoriossa molemmista paikoista rekrytoiduille koehenkilöille. Minnesotan yliopiston yleisessä kliinisessä tutkimuskeskuksessa (GCRC) kerätty veri lähetettiin yön yli Bastyrin yliopistoon. Minnesotan yliopistosta Bastyrin yliopistoon kuljetetun veren laatua arvioitiin seuraavien kriteerien perusteella. Näytteistä, jotka olivat Bastyrin laboratorioon saapuessaan yli 48 tuntia vanhempia, lymfosyytit eristettiin, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin trypansinivärjäyksellä. Jos elinkelpoisuus oli yli 80 %, määritys suoritettiin. Jos elinkelpoisuus oli alle 80 prosenttia, näytteet hylättiin. Perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) eristettiin Ficoll-Hypaque-gradientilla (tiheys = 1,070 g/ml), pestiin kahdesti PBS:llä ja pidettiin RPMI 1640:ssä, 10 % FBS:ssä, jossa oli 2 mM L-Gln:ää ja penisilliini-streptomysiiniä (1000 U/ml; 1 mg/ml). Näiden PBMC-näytteiden NK-soluaktiivisuus, mitattuna kyvyllä tappaa K562-kasvaimen kohdesoluja, arvioitiin kolmena kappaleena efektorin ja kohteen (E : T) suhteilla 50 : 1, 25 : 1 ja 12,5 : 1 julkaistujen menetelmien mukaisesti. Kohdesolut leimattiin 3,3′-dioctadecylocyloxacarbocyanine perchlorate (DiOC18) -aineella ja niitä viljeltiin yhdessä PBMC:n efektorisolujen kanssa neljän tunnin ajan. Spontaanin kohdesolukuoleman määrittämiseksi otettiin mukaan kontrollinäyte, jossa oli vain K562-soluja. Inkuboinnin jälkeen lisättiin propidiumjodidia kuolleiden solujen havaitsemiseksi. Kuolleiden kohdesolujen prosenttiosuus määritettiin vähentämällä spontaanien lyysien prosenttiosuus vastaavien E : T-suhteesta. Standardoitua NK-solujen aktiivisuutta edustamaan lyysiyksiköt laskettiin aiemmin julkaistulla ja validoidulla ohjelmistolla käyttäen seuraavia parametreja: kohde kuoppaa kohti = 10 000; LU solumäärää kohti = 107; käyrän maksimi = 48; lyysiprosentti = 20 . LU20-arvot, jotka on määritelty E : T-suhde, jossa 20 prosenttia kohdesoluista kuolee, ekstrapoloitiin PSL:n ja log E:n annos-vastekäyristä:

2.5.3. Immunofenotyypin määritys PBMC-subsetit

PBMC-suspensiot (5×105 solua) laitettiin kolmeen putkeen, pestiin PBS:llä, lingottiin, supernatantit piraatiksi ja solupelletit resuspendoitiin 100 μl:aan PBS:ää. Putken 1 PBMC-solut värjättiin CD3-PC5:llä, CD4-PE:llä ja CD8-FITC:llä; putki 2: CD3-PC5, CD16-FITC ja CD56-PE; putki 3: CD14-PC5. Putkia vorteksoitiin lyhyesti, peitettiin ja inkuboitiin jäällä 15 minuuttia, minkä jälkeen solut pestiin kahdesti kylmällä PBS:llä, resuspendoitiin 0,5 ml:aan PBS:ää ja PBMC:n osajoukkojen prosenttiosuus määritettiin virtaussytometrisellä analyysillä Beckman Coulter FC500:lla ja CXP-ohjelmistolla. Kliinisen tutkimuksen protokolla

Tutkimuksen kesto oli yhdeksän viikkoa ja se alkoi sädehoidon päätyttyä. Siihen sisältyi kuusi viikkoa tuotteen käyttöä, jota seurasi kolmen viikon pesujakso ilman tuotteen käyttöä (kuva 1). Potilaat seulottiin ja todettiin tutkimuskelpoisiksi kemoterapian päätyttyä ja ennen sädehoidon aloittamista. Tutkimus vaati kuusi käyntiä kliinisissä tutkimuskeskuksissa. Ensimmäinen tutkimuskäynti tapahtui ennen sädehoidon aloittamista, jolloin otettiin peruslaboratoriotulokset. Ensimmäisen viikon kuluessa sädehoidon päättymisestä osallistujat kävivät toisella tutkimuskäynnillä, jolloin otettiin laboratoriotulokset ja aloitettiin yhdeksän viikon tutkimus. Osallistujille annettiin kuuden viikon Tv-tuote, ja he palasivat tutkimuskeskukseen käynneille kolme, neljä ja viisi kahden viikon välein laboratorioanalyysejä ja tuotteen siedettävyyden ja haittavaikutusten arviointia varten. Viimeinen (kuudes) käynti oli yhdeksän viikon kohdalla, kolmen viikon tuotevapaan jälkeen, viimeistä laboratoriotutkimusta ja mahdollisten pitkittyneiden haittatapahtumien arviointia varten.

Vaiheen I annoksen suurentamistutkimuksen tutkimuspöytäkirja.

Eskalaatioprotokollassa vähintään kolmen osallistujan kohortit nauttivat suun kautta Tv:tä jaettuina annoksina päivittäin kuuden viikon ajan. Ensimmäinen annoskohortti otti 3 grammaa/vrk kahtena jaettuna annoksena; toinen kohortti otti 6 grammaa/vrk kahtena jaettuna annoksena; kolmas kohortti otti 9 grammaa/vrk kolmena jaettuna annoksena. Kolme grammaa päivässä on yleisimmin käytetty annos luonnonlääketieteellisessä lääketieteessä, ja Japanissa käytetään jopa 9 grammaa. Tutkimuksen tavoitteena oli määrittää suurin siedetty annos (MTD), joka osoitti turvallisuuden ja siedettävyyden (taulukko 1).

Kohortti Tv g/vrk Ajoitus annoksen suurentamiselle (käyttäen seuraavassa laatikossa olevaa suurentamispäätöksentekosääntöä) 1 3 Aloitusannos (kliinisessä käytännössä käytetty annos) 2 6 Aloitetaan, kun ryhmässä on vähintään 3 koehenkilöä. 1, jotka ovat saaneet päätökseen 2 viikon valmisteen käytön ilman annosta rajoittavaa toksisuutta (DLT-määritelty mihin tahansa hoitoon liittyvänä toksisuutena > asteen 1) 3 9 Aloitetaan sen jälkeen kun vähintään 3 koehenkilöä ryhmässä 2, jotka ovat saaneet päätökseen 2 viikon valmisteen käytön ilman DLT:tä

Taulukko 1

Vaiheen I annoksen eskalointi.

3. Tulokset

3.1. Tutkimustulokset. Haittavaikutukset

Tämän annoksen eskalointitutkimuksen tulokset osoittivat, että enintään 9 grammaa/vrk Tv-valmistetta siedettiin hyvin rintasyöpää sairastavilla naisilla kuuden viikon ajan sädehoidon jälkeisessä hoidossa. Haittavaikutuksia oli yhdeksän; seitsemän lievää, yksi kohtalainen ja vain yksi asteen 3 haittatapahtuma, joka oli yhden osallistujan ahdistuskohtaus, joka ei todennäköisesti liittynyt tutkimuslääkitykseen (taulukko 2). Muita raportoituja lieviä haittatapahtumia olivat ohimenevä sydämentykytys, sydämentykytys, ummetus, rintakipu, kuume, säteilyihottuma ja flunssa/flunssaoireet. Kaikki kolme annosta olivat hyvin siedettyjä, eikä osallistujilla ollut vaikeuksia niellä enintään 9 kapselia kolme kertaa päivässä. Huomionarvoista on, että pahoinvointia tai ruoansulatuskanavan häiriöitä ei raportoitu; näitä kahta haittavaikutusta raportoitiin aiemmissa muiden Tv-uutteiden kliinisissä tutkimuksissa.

Osuus Luokka Tiheys annos Kuvaus Suhde Osuus Ohjearvo Lievä 7 3 g Sydänten närästys Mahdollisesti siihen liittyvä Ei odotettavissa 3 g Sydämen sydämentykytykset Epätodennäköistä. liittyy Ei odotettavissa 6 g Sisäinen ummetus Todennäköisesti liittyy Ei odotettavissa 6 g Rintakipu Mahdollisesti liittyy Ei odotettavissa 6 g Kuume ja samanaikainen R-ihottuma (2) Todennäköisesti liittyy Ei odotettavissa 9 g Kylmää tai flunssaakaltaiset oireet Todennäköisesti liittymättömiä Ei odotettavissa Moderate 1 6 g Väsymys; sekundaarinen UT-infektioon Todennäköisesti liittyy Ei odotettavissa Kova 1 6 g Ahdistustapahtuma Mahdollisesti. liittyvä Epätavallinen Yhteensä 9

Taulukko 2

Haittavaikutustapahtumaraportointi.

3.2. Immuunivaste

Sädehoito (RT) ja Tv:n anto eivät vaikuttaneet punasoluosastoon. Absoluuttinen punasolujen määrä, hemoglobiini ja hematokriitti olivat normaalit ensimmäisellä käyntikerralla, joka oli päivää ennen RT:n alkamista, ja ne pysyivät normaalien rajojen sisällä koko loppututkimuksen ajan. Absoluuttinen valkosolujen määrä ja neutrofiilien määrä olivat yleisesti ottaen normaaliarvojen rajoissa kaikilla naisilla sekä ennen RT:tä että sen jälkeen ja RT:n jälkeisinä viikkoina, kun he käyttivät Tv:tä (tietoja ei ole esitetty). Lymfosyyttien absoluuttinen määrä oli kuitenkin erilainen kuin muut CBC:n osajoukot. Koska kelpoisuuskriteerit olivat identtiset keskuksissamme vuodesta 2006 lähtien tehdyissä tutkimuksissa, yhdistimme tehon lisäämiseksi tiedot havainnointitutkimuksestamme (𝑁=14), joka osoitti RT:n aiheuttavan immuunivirheitä naisilla, joilla oli I-III-vaiheen rintasyöpä, ja tämänhetkisestä annoksen eskalointitutkimuksestamme (𝑁=9). Molempien tutkimusten 23 naisen, joilla oli rintaleikkauksen ja solunsalpaajahoidon jälkeen I-III-vaiheen rintasyöpä ja jotka sen jälkeen saivat sädehoitoa, lymfosyytit olivat ennen sädehoitoa normaaleissa rajoissa, mutta ne putosivat epätavallisen alhaiselle tasolle sädehoidon jälkeen. Kaikkien 23 koehenkilön keskimääräinen lymfosyyttimäärä ennen RT:tä oli 1,027±0,298 ja laski 20 prosenttia RT:n jälkeen 0,681±0,254:een, mikä ero oli tilastollisesti merkitsevä . Annostutkimuksessa kaksi suurempaa suun kautta annettua Tv-annosta (6 ja 9 g) johti lymfosyyttien määrän nopeampaan palautumiseen (kuva 2). Lymfosyyttien määrä elpyi vähitellen tarkkailuryhmässä, mutta keskimääräiset lymfosyyttien lukumäärät pysyivät 6 ja 9 g Tv:tä saaneiden kohorttien lukumääriä alhaisempina kuuden viikon kuluttua RT:n jälkeen. Kunkin annoskohortin pienen lukumäärän vuoksi (𝑁=3) tilastollista merkitsevyyttä havaittiin vain tarkkailuryhmän ja 9 g Tv-ryhmän välillä sädehoidon jälkeisessä 2 viikon aikapisteessä. Sädehoito alensi lymfosyyttien absoluuttista määrää tilastollisesti merkitsevästi naisilla, joilla oli I-III-vaiheen rintasyöpä ja jotka olivat saaneet leikkauksen ja solunsalpaajahoidon päätökseen (ks. kuva 2).

Kuva 2

Luonnollisten tappajasolujen funktionaalinen aktiivisuus väheni dramaattisesti pre- hoidon jälkeiseen aikaan kaikilla 23 rintasyöpäpotilaalla, jotka suorittivat kaksi ensimmäistä käyntiä joko havainnointitutkimuksessa (𝑁=14) tai annoksen eskalointitutkimuksessa (𝑁=9). Kuvasta 3 käy ilmi, että keskimääräinen NK-soluaktiivisuus oli 19,941±18,959 ennen RT:tä ja laski 9,872±13,454:ään RT:n jälkeen (𝑁=23). Tämä lasku oli tilastollisesti merkitsevä (𝑡(44)=2,077, 𝑃=0,043). Suuntaus kohti lisääntynyttä NK-soluaktiivisuutta havaittiin 6 g Tv-annoksen kohortissa.

Kuvio 3

Sädehoito lamaannutti tilastoivasti merkitsevästi LU:lla kuvattua NK-solujen toimintakykyisyyttä, joka saadaan laskettua 107:llä jaetuilla antamilla annostasojen perusteella laskettuna LU:lla20. LU20 on efektorisolujen (NK) määrä, joka tarvitaan 20 prosentin spesifisten lyysien aikaansaamiseksi kohdesoluissa (K562). Näin ollen mitä pienempi LU20 on, sitä tehokkaampia NK-solut ovat. Tämän tuloksen tulkinta saattoi olla vaikeaa yksilöiden erilaisten vasteiden vuoksi sienilisän antamisen jälkeen. NK-solujen aktiivisuuden tilapäisen lisääntymisen suuntaus havaittiin 6 g:n annosryhmässä (ks. kuva 3).

Määritimme myös sädehoidon ja Tv:n antamisen vaikutukset T-, B- ja NK-solupopulaatioihin niillä yhdeksällä potilaalla, jotka suorittivat vaiheen I annoseskalaatiotutkimuksen. WBC- ja virtaussytometrian immunofenotyyppitiedoista laskettiin absoluuttinen arvo (mm3). Sädehoidolla ei ollut merkitsevää vaikutusta CD4+ ja CD8+ T-solujen, CD19+ B-solujen ja CD16+/56+ NK-solupopulaatioihin. Koska immunofenotyypin määritystä ei suoritettu havainnointitutkimuksessa, yhdistelmäpisteiden (ennen ja jälkeen sädehoidon) lukumäärät olivat niistä, jotka osallistuivat annoksen eskalointitutkimukseen (𝑁=9). CD8+ T-solujen määrä ei ollut tilastollisesti erilainen ennen sädehoitoa ja sen jälkeen (kuva 4). Perifeerisessä veressä havaittiin kuitenkin CD8+ T-solujen ja CD19+ B-solujen lisääntymistä Tv-lisäryhmissä. CD8+ T-solujen määrä 9 viikon annostutkimuksen aikana oli suurentunut 9 g Tv-annoksen kohortissa verrattuna sekä 3 g:n että 6 g:n ryhmään. Yksisuuntaista ANOVA-analyysiä käytettiin analysoimaan annosryhmien välistä kokonaiseroa hoitojakson aikana (2-4-6 viikkoa). Se osoitti tilastollisesti merkitsevän CD8+-sytotoksisten T-solujen lisääntymisen 9 g:n ryhmässä verrattuna sekä 3 g:n että 6 g:n ryhmään (𝐹(2,6)=42,04, 𝑃=0,0003). Ero 3 g:n ja 6 g:n ryhmien välillä ei ollut merkitsevä (ks. kuva 4).

Kuva 4

Kahdeksan annosteluryhmään osallistujan yhdistelmäpistemäärän mukaan sädehoito ei muuttanut merkitsevästi B- solujen lukumäärää (kuva 5). Tv:n antamiseen liittyi kuitenkin CD19+ B-solujen määrän lisääntyminen. Yksisuuntaista ANOVA-analyysiä käytettiin analysoimaan annosryhmien välistä kokonaiseroa hoitojakson aikana (2-4-6 viikkoa). Se osoitti CD19+ B-solujen tilastollisesti merkitsevän lisääntymisen 6 g:n annosryhmässä verrattuna 3 g:n ryhmään . Ero 3 g:n ja 9 g:n ryhmien sekä 6 g:n ja 9 g:n ryhmien välillä ei ollut merkitsevä (ks. kuva 5).

Kuva 5

Cd16+56+ NK-solujen lukumäärän osalta ei havaittu merkitseviä muutoksia sen enempää sädehoidon kuin Tv:n annostelunkaan seurauksena (kuva 6). Koska NK-solujen aktiivisuus sekä väheni RT:n vaikutuksesta että lisääntyi 6 gramman Tv-annoksen kohortissa (kuva 3), mutta NK-solupopulaatioihin nämä hoidot eivät näyttäneet merkittävästi vaikuttavan, tiedot viittaavat siihen, että NK-solujen aktiivisuuden lisääntyminen ei johdu hoidon aiheuttamista muutoksista NK-solujen määrässä. NK-solupopulaatioihin ei vaikuttanut sen enempää sädehoito kuin suun kautta annetut Tv-annoksetkaan (ks. kuva 6).

Kuva 6

4. Keskustelu

Tässä tutkimuksessa saadut tulokset osoittavat Trametes versicolor (Tv) -valmisteen suun kautta annostelun turvallisuuden 3, 6 ja 9 gramman annoksina, eikä tämän hoidon vakavia haittatapahtumia ole ilmennyt naisilla rintasyövän sädehoidon jälkeen. Tämä tutkimus vahvistaa aikaisemman raporttimme, jonka mukaan rintasyövän tavanomainen rintakehän sädehoito ei vaikuta punasoluosastoon tai neutrofiileihin, mutta aiheuttaa erityisiä immuunipuutoksia, kuten lymfopeniaa ja heikentynyttä NK-solujen toiminnallista aktiivisuutta. NK-soluhoidot ovat nousemassa maailmanlaajuisesti lupaaviksi syövänvastaisiksi hoidoiksi, joissa hyödynnetään NK-efektoreiden nopeaa sytolyyttistä vaikutusta ja niiden mahdollisesti laajaa sovellettavuutta monenlaisia pahanlaatuisia kasvaimia vastaan. Uusi havaintomme on, että NK-solujen aktiivisuuden väheneminen näyttää olevan riippumaton NK-solujen lukumäärästä. Tässä osoitamme, että RT vähentää NK-solujen aktiivisuutta NK-solua kohti. Suuremmat suun kautta annetut Tv-annokset 6 ja 9 grammaa/vrk liittyivät lymfosyyttien ja NK-soluaktiivisuuden nopeampaan palautumiseen sekä CD8+T-solujen ja CD19+ B-solujen määrän lisääntymiseen. Tv:llä ei ollut selvää vaikutusta CD 16+/56+ NK-solujen määrään, ainoastaan niiden toiminnalliseen aktiivisuuteen. Vaikka on havaittavissa suuntaus siihen, että suuremmilla Tv-annoksilla on voimakkaampi immunologinen aktiivisuus, tätä vaiheen I annostutkimusta ei suunniteltu arvioimaan annosriippuvaisia muutoksia immuunimarkkereissa. Alustavat tiedot näistä pienistä näytteistä (3 rintasyöpäpotilasta annoskohorttiryhmää kohti), jotka osoittavat annoksesta riippuvia suuntauksia, johtavat testattavaan hypoteesiin, jonka mukaan 6 grammaa Tv:tä voi johtaa nopeampaan immuunijärjestelmän palautumiseen sädehoidon jälkeen. Tämän vaiheen I tutkimuksen tulokset oikeuttavat ja toimivat alustana, jonka pohjalta voidaan edetä vaiheen II satunnaistetuissa kontrolloiduissa annos-vaste-tutkimuksissa.

Vaikka tämä tutkimus osoitti Trametes versicolor -valmisteen turvallisuuden 9 gramman vuorokausiannoksella, annostutkimus suunniteltiin arvioimaan suurinta siedettyä annosta (MDT); siksi tässä tutkimuksessa ei määritetty turvallisuutta ja siedettävyyttä suurimmalla annoksella. Naisia ei saatu rekrytoitua 12 gramman ja sitä suurempaan kohorttiin useiden rajoittavien tekijöiden vuoksi. Ensinnäkin naisten oli täytettävä erittäin tiukat kelpoisuuskriteerit, jotta heidät voitiin ottaa mukaan tutkimukseen, ja heidän oli käytävä leikkauksessa, kemoterapiassa ja sädehoidossa hoitoprotokollassaan. Tällä hetkellä monet rintasyöpädiagnoosin saaneet naiset eivät saa kolmoishoitoa. Monilla naisilla diagnosoidaan ensimmäisen vaiheen rintasyöpä, ja heille tehdään lumpektomia ja sädehoito, ja jos heidän onkotyyppipistemääränsä on alhainen, he eivät saa kemoterapiaa. Lisäksi monet naiset rekrytoitiin muihin tutkimuksiin, ja he saivat runsaasti pyyntöjä ilmoittautua lisätutkimuksiin. Mikä tärkeintä, havaitsimme, että naiset, jotka olivat suorittaneet pitkän kemoterapia- ja sädehoito-ohjelman, olivat haluttomia osallistumaan yhdeksän viikkoa kestävään tutkimukseen, joka edellytti kuutta lisäkäyntiä yliopistolla.

Vaiheen I tiedot viittaavat siihen, että Tv on turvallinen immunoterapia rintasyöpäpotilaille, joka voi korjata sädehoitoon liittyviä immuunivikoja. Tulostemme perusteella sädehoidon jälkeisessä tilanteessa suun kautta annettu Tv-sienihoito voi lisätä lymfosyyttien lukumäärää ja NK-solujen tuumorisidista aktiivisuutta. Relapsi primaarisen rintasyövän hoidon jälkeen voi liittyä synnynnäisen ja adaptiivisen immuunijärjestelmän puutteisiin. Keskuksemme tutkimukset viittaavat edelleen siihen, että Trametes versicolor edustaa uutta immuunihoitoa, jolla on merkittäviä sovelluksia syövän hoidossa.

Eettinen hyväksyntä

Kaikki suoritetut kokeet ovat Yhdysvaltain voimassa olevien lakien mukaisia.

Interressiristiriita

Tekijät ilmoittavat, että heillä ei ole eturistiriitoja.

Kiitokset

Tätä työtä ovat tukeneet National Institutes of Health/National Center for Complementary and Alternative Medicine (U19 AT 1998) ja Gateway for Cancer Research Grant no. G-04-002. Kirjoittajat kiittävät myös toimituksellisesta tuesta Rebekah Prattia U of MN:n perhelääketieteen osastolta ja Daniel Strengeä hänen panoksestaan.