- Abstract
- 1. Inleiding
- 2. Materiaal en Methoden
- 2.1. Dieren
- 2.2. Inductie van acute ontsteking
- 2.3. Groepen en Behandelingen
- 2.4. Analyse van de gegevens
- 2.5. Immunohistochemische Analyse
- 2.6. Histomorphometry
- 2.7. Statistische analyse
- 2.8. Bio-ethische criteria
- 3. Resultaten
- 4. Discussie
- Belangenconflict
- Acknowledgments
Abstract
De effecten van Arnica montana 6cH op de individuele modulatie van acute ontstekingskinetiek bij ratten werden geëvalueerd. Volwassen mannelijke Wistar ratten werden geïnoculeerd met 1% carrageen in de voetzool en behandeld met Arnica montana 6cH, dexamethason (4,0 mg/kg; positieve controle) of 5% hydroalcoholische oplossing (negatieve controle), per os, telkens 15 minuten, tussen 30 en 180 minuten na de inoculatie van de irriterende stof. Histopathologische en immunohistochemische procedures werden uitgevoerd om een panel van ontstekingspositieve cellen te verkrijgen voor CD3 (T-lymfocyten), CD45RA (B-lymfocyten), CD18 (beta 2 integrine), CD163 (ED2 proteïne), CD54 (ICAM-1), en MAC 387 (monocyten en macrofagen). De statistische behandeling van de gegevens omvatte a posteriori classificatie van dieren uit elke groep () in twee subgroepen die spontaan vroegtijdig of laat oedeem vertoonden. Dieren die vroegtijdig oedeem vertoonden waren minder gevoelig voor Arnica montana 6cH in relatie tot hemodynamische veranderingen. In plaats daarvan vertoonden de ratten die laat oedeem vertoonden minder intens oedeem (), een lager percentage mestcel degranulatie (), en een toename van de diameter van de lymfevaten (). De gegevens suggereren een individuele kwalitatieve aanpassing van inflammatoire vasculaire gebeurtenissen door Arnica montana 6cH.
1. Inleiding
Een van de meest besproken controverses over de werkzaamheid van homeopathische geneesmiddelen is de noodzaak om een perfecte symptomatische analogie te identificeren tussen patiënt en geneesmiddelpathogene, dat wil zeggen de noodzaak van individueel voorschrijven volgens het similia-principe. Dit specifieke kenmerk is een van de moeilijkste uitdagingen van het wetenschappelijk onderzoek op dit gebied vanwege de technische moeilijkheid om het experimenteel aan te tonen. In de literatuur zijn hierover inderdaad weinig experimentele studies te vinden. Het experimenteel aantonen van deze bijzonderheid en het begrijpen van de mechanismen ervan kunnen dus nuttige hulpmiddelen zijn om de chronische controverses over de werkzaamheid van homeopathie op te lossen, die vaak in klinische proeven worden waargenomen. Onlangs toonde een elegante in vitro studie het belang aan van de regulatorische en adaptieve celmechanismen in de omvang van homeopathische middelen die cytotoxische effecten induceren op kankercellen. Van 1997 tot 2008 hebben we een stapsgewijze onderzoekstool ontwikkeld over de biologische effecten van homeopathische Arnica montana, in het bijzonder de Arnica montana 6cH, met gebruik van diermodellen. Kort samengevat tonen de resultaten van deze studies aan dat Arnica montana 6cH in staat is om het acute ontstekingsproces bij ratten te moduleren, aangezien het de lymfatische oedeemopname en de lokale bloedstroom kan verhogen, alsook de array van polymorfonucleaire celmigratie kan bevorderen. Al deze experimenten worden chronologisch beschreven in .
De Arnica montana is een plant die behoort tot de Compositae familie en groeit op de heuvels van Oost en Centraal Europa. In de bladeren, bloemen en wortels zijn verschillende actieve bestanddelen geïdentificeerd, zoals alcoholen, tannine, flavonoïden en sesquirterpene lactonen, met name helenalin . De belangrijkste werking van helenaline is de remming van de transcriptiefactor NFκβ, vergelijkbaar met corticoïde steroïden. De toevallige inname van de plant kan vasodilatatie, bloedstagnatie, bloedingen, oedeem en pijn veroorzaken. Deze effecten zijn de belangrijkste onderwerpen die in de Arnica montana materia medica worden beschreven. Daarom zijn traumapijn en de opname van oedeem de belangrijkste indicaties voor het klinisch en experimenteel gebruik van homeopathische preparaten van Arnica montana . Recent werden andere toepassingen van hoog verdunde Arnica montana voorgesteld, zoals het agronomisch gebruik van Arnica in de potenties 3, 6, en 12cH om de plantengroei te verbeteren: (a) de vermeende modulatie van vasculaire en celgebeurtenissen in acute ontsteking door Arnica, toegespitst op de snelheid van neutrofielen, monocyten, T- en B-lymfocyten aanwezig in de ontstekingshaard, en de intensiteit van de expressie van adhesiemoleculen in ontstoken bindweefsel, met behulp van immunohistochemische en histomorfometrische technieken; (b) de vermeende interferentie op de outputs van de natuurlijke individuele variaties van ontstekingskinetiek.
2. Materiaal en Methoden
2.1. Dieren
Mannelijke volwassen Wistar ratten, met een gewicht tussen 250 en 300 g, werden gebruikt. De ratten werden gehouden in conventionele polypropyleen laboratoriumkooien (5 tot 7 dieren per kooi), met gecontroleerde temperatuur (25 ± 3°C) en lichtcyclus (lichten aan van 06:00 AM tot 06:00 PM). Water en voedsel werden ad libitum aangeboden. Voor het begin van het experiment werden de dieren willekeurig gewogen, gescheiden en geïdentificeerd in drie groepen van elk 20 ratten.
2.2. Inductie van acute ontsteking
Het acute ontstekingsproces werd geïnduceerd door de subcutane inoculatie van 1% kappa carrageen (SIGMA) verdund in steriele zoutoplossing in de voetzool, waarvan de dikte vooraf werd gemeten met een micrometer (MYTUTOYO).
Na 30 en 180 minuten werden nieuwe metingen gedaan, om de pre- en post-behandeling oedeem evolutie in functie van de tijd te evalueren. Zo werd in de eerste 30 minuten de spontane oedeemvorming gemeten en in de resterende 150 minuten de effecten van het geneesmiddel, aangezien de behandelingen na de meting van 30 minuten werden uitgevoerd. Na 180 minuten werden de dieren geëuthanaseerd door cervicale tractie onder diepe anesthesie, en werden de voetzolen geoogst en gefixeerd in gebufferde 10% formaldehyde gedurende 24 uur-maximaal-voor ze verwerkt werden met conventionele histologische technieken, inclusief paraffine inbedding, hematoxyline-eosine, en toluidine blauwe kleuring. Dezelfde paraffineblokken werden gebruikt om de immunohistochemische procedures uit te voeren. Voor elke voetzool werd één enkel objectglaasje gemaakt.
2.3. Groepen en Behandelingen
Elke groep ratten werd behandeld met een specifieke stof, volgens tabel 1. De ratten die werden behandeld met Arnica montana 6cH (experimenteel) en met een niet-gesuikerde 5% hydroalcoholische oplossing (negatieve controle) van dezelfde leverancier, werden geïdentificeerd met codes, zodat alle behandelingen en metingen blind werden uitgevoerd. Deze codes werden aangemaakt door een laborant die niet aan de studie deelnam en in een verzegeld blad bewaard tot aan de statistische analyse, toen zij werden onthuld.
|
|||||||||||||||||||||
De met dexamethason behandelde ratten (positieve controle) werden open gemaakt, vanwege de fysieke kenmerken van de gebruikte formulering; deze was heel anders dan de homeopathische en dus gemakkelijk te herkennen. De behandeling en de microscopische analyse van de monsters werden uitgevoerd door twee onafhankelijke personen, steeds in blinde toestand. De totale dosis dexamethason die gebruikt werd om ontstekingsremmende effecten te veroorzaken was 4 mg/kg, volgens de eerder gedefinieerde normen. Dit gefractioneerde protocol werd ontworpen om een gebruikelijke homeopathische klinische toestand van acute ontstekingsbehandeling te reproduceren en werd ook gebruikt in de eerdere studies uitgevoerd door onze groep . Dexamethason werd gekozen als positieve controlegroep omdat het werkingsmechanisme ervan het mechanisme van helenaline nabootst, het belangrijkste werkzame bestanddeel van Arnica montana.
De commerciële Arnica montana 6cH werd bereid in 5% hydroalcoholische oplossing door een apotheek gecertificeerd door het regulerende Braziliaanse Nationale Agentschap voor Sanitaire Vigilantie (ANVISA), Farmácia Sensitiva, São Paulo. De bij de bereiding gebruikte technieken waren in overeenstemming met de Braziliaanse Homeopathische Farmacopea, 2e Editie, 1997.
2.4. Analyse van de gegevens
Na de eerste plotten van de oedeemintensiteit verkregen tijdens de voorbehandelingsperiode (van nul tot 30 minuten), werden de gegevens geordend in halvemaanvormige volgorde met behulp van een Excel 2003 software, op een zodanige wijze dat het mogelijk zou zijn om, voor elke groep, de 10 ratten (50%) die spontaan een lagere oedeemintensiteit vertoonden en de 10 ratten (50%) die een hogere oedeemintensiteit vertoonden, te verdelen. Aldus werden twee subgroepen van 10 dieren gevormd voor elke experimentele groep, het karakteriseren van twee verschillende rat subpopulaties op basis van inflammatoire kinetische patroon (tabel 2). De gehele experimentele opzet wordt toegelicht in een stroomschema (figuur 7).
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
Aangezien de klassieke curve van carrageen-geïnduceerd oedeem tot 6 uur na inoculatie loopt, was de keuze van beide tijdstippen (30 en 180 minuten) gebaseerd op het bekende plateau ervan. Bovendien blijkt uit eerdere studies over de effecten van Arnica 6cH op door carrageen geïnduceerd oedeem dat er na deze periode geen effecten meer zijn. De kinetiek van de evaluatie van het ontstekingsproces na de injectie van carrageen is een klassiek experimenteel model ontwikkeld in de jaren 70. Het is dus een betrouwbaar criterium om in dit geval te gebruiken.
Na het plotten van de gegevens (Figuren 1(a) en 1(b)), werden beide kinetische patronen gemakkelijk te identificeren: (a) dieren die minder intens oedeem vertoonden tijdens de eerste voorbehandeling 30 minuten hadden de piek tussen 30 en 180 minuten (genoemd laat oedeem) en (b) degenen die meer intens oedeem vertoonden in de eerste 30 minuten verminderden na deze periode (genoemd vroeg oedeem).
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Oedeem (mm) in verschillende groepen en subgroepen. (a) Ontwikkeling van het oedeem in functie van de tijd in de vroege oedeemsubgroep; (b) ontwikkeling van het oedeem in functie van de tijd in de late oedeemsubgroep; (c) intensiteit van het oedeem aan het einde van het experiment in de vroege oedeemsubgroep; (d) intensiteit van het oedeem aan het einde van het experiment in de late oedeemsubgroep. ; ANOVA, Tuckey-Krammer, in verhouding tot de controle. De waarden vertegenwoordigen gemiddelde ± standaardafwijking.
Alle resultaten werden vergeleken tussen de zes subgroepen. Deze selectie a posteriori werd gemaakt om de rol van individuele idiosyncrasie in het Arnica effect volgens het similia principe na te gaan, aangezien de snelheid van oedeem remissie één van de meest bekende Arnica montana symptomen is die in de materia medica beschreven worden.
2.5. Immunohistochemische Analyse
Alle objectglaasjes werden gedurende vijf minuten gewassen met 1 : 1 alcohol-ether oplossing en vervolgens gedroogd met een zacht vel papier en behandeld met 1 : 10 poly-L-lysine (SIGMA). Vervolgens werden met paraffine ingebedde weefselplakjes van 5 micron op het oppervlak overgebracht met behulp van een histologisch bad van 40°C. Vervolgens werden de plakjes ontmaskerd door twee baden in absolute xylol gedurende 2 minuten en twee baden in absolute alcohol gedurende 3 minuten. De objectglaasjes werden vervolgens gewassen in stromend leidingwater.
Voor de immunohistochemische procedures werd een eerste stap voor antigeen retrieving gemaakt met behulp van warmtebehandeling van de monsters. De objectglaasjes werden in een citraat buffer bad (SIGMA), pH = 6.0, met 0.5% tween 20 (DAKO) gebracht, en verwarmd in een elektrische pot bij 80°C (PANASONIC) gedurende 20 minuten. Daarna werden de dia’s gewassen in PBS, pH = 7,2 (SIGMA), gedurende 6 minuten en gedroogd met een zacht absorberend papier, en het weefselmonster werd afgebakend met een geschikte pen (Pap-pen, AbCam).
De endogene peroxidase-activiteit werd geblokkeerd door incubatie van de weefsels in een 3% H2O2-oplossing verdund in methanol (ISOFAR), gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Vervolgens werden ze gedurende 6 minuten gewassen in PBS (SIGMA) en gedurende 20 minuten bij 25°C behandeld met 2,5% Paard Normaal Serum (VECTOR), voor het blokkeren van aspecifieke eiwitbindingsplaatsen. Onmiddellijk na deze stap werden de weefsels behandeld met het primaire antilichaam (zie verdunningen en specificaties in tabel 3) en een nacht bij 4°C in een vochtige kamer laten staan. Alle verdunningen van primaire antilichamen werden gemaakt in 1% boviene serum albumine (BSA).
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
De volgende dag werden de coupes gedurende 6 minuten gewassen in PBS (sigma) en behandeld met het polymeer-peroxidase-geconjugeerd secundair antilichaam (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR), bij 25°C gedurende 30 minuten. Na een nieuwe wasbeurt in PBS (6 minuten), werden ze gedurende 3 seconden blootgesteld aan DAB (DAKO), nogmaals gewassen in leidingwater, gekleurd met Harris hematoxyline (01 minuut), en gemonteerd.
2.6. Histomorphometry
Voor de evaluatie van mastcel degranulatie percentage, tweehonderd cellen per dia gekleurd door Toluidine blauw methode werden geteld, met behulp van aaneengesloten velden, het differentiëren van de gedegranuleerde van de niet-gedegranuleerde degenen. Om de diameter van de lymfevaten te bepalen, werden vijf toevallig gekozen velden geëvalueerd met een 200 x objectief. Van elk veld werden fotomicrofoto’s gemaakt (CANNON), en het percentage lymfevaten per veld werd bepaald met een digitaal beeldanalysesysteem (Image Tool 3.0). De diameter van de lymfevaten kan worden beschouwd als een goede parameter om de lymfatische oedeemopname te evalueren, volgens eerdere waarnemingen . Aangezien het protocol over acute gebeurtenissen ging, werd de hypothese van lymfangiogenese niet in overweging genomen.
Voor de anti-CD45RA, CD3, CD18, CD163, en MAC 387 markers, werden tien toevallig gekozen microscopische velden per objectglaasje geobserveerd, met behulp van immersie objectief (magnitude 1000 x). Zij omvatten bijna al het subcutane vasculaire bindweefsel van het kompres, en het aantal positieve cellen per veld werd genoteerd. In het geval van Anti-MAC 387 werden alleen mononucleaire positieve cellen in aanmerking genomen. De met hematoxyline-eosine gekleurde objectglaasjes werden gebruikt om het aantal PMN-cellen per veld te tellen. In dit geval werden de cellen alleen aan de hand van morfologische criteria herkend. De expressie van CD163 is evenredig met de maturatie van de macrofagen; daarom werden deze resultaten uitgedrukt als de verhouding tussen CD163/MAC 387 mononucleaire positieve cellen per veld.
Voor de Anti-CD54 werd de intensiteit van de positiviteit op het oppervlak van de endotheelcellen geëvalueerd met een scoresysteem, variërend van 1 tot 4. Vijf toevallig gekozen velden werden per objectglaasje geëvalueerd, met behulp van immersie objectief (grootte 1000 x), en de scores werden door twee onafhankelijke waarnemers gedaan, op een blinde manier, om subjectieve interpretatie in de analyse te vermijden. De eindscore voor elke objectglaasje was gelijk aan de som van de deelscores. De criteria voor de score-indeling zijn weergegeven in tabel 4.
|
||||||||||||||||||||||||
2.7. Statistische analyse
De Bartlett test werd eerst gebruikt om de Gaussische verdeling van de meerderheid van de datapunten te bepalen. Vervolgens werd ANOVA/Tuckey-Krammer of Kruskall-Wallis/Dunn uitgevoerd, overeenkomstig de resultaten van Bartlett. De evaluatie van mestcel degranulatie, in plaats daarvan, werd geëvalueerd door test. De waarden van werden als significant beschouwd. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van de INSTAT 3 software.
In verband met oedeem, werd een extra intragroep statistische analyse ook uitgevoerd, en de vergelijking van oedeem intensiteit tussen subgroepen op 30 minuten (spontaan oedeem) onthulde significante verschillen (Tuckey-Krammer, ), valideren van de voorgestelde experimentele opzet.
2.8. Bio-ethische criteria
Het protocol werd goedgekeurd door de Bio-ethische Commissie van Universidade Paulista (protocol 011/07), volgens de wet van de staat São Paulo nr. 11.977/05 (Dierenbeschermingscode van de staat São Paulo, Brazilië). Deze procedure is in overeenstemming met de Europese Overeenkomst voor de Bescherming van Gewervelde Dieren, gebruikt voor Experimentele en Andere Wetenschappelijke Doeleinden en haar appendix.
3. Resultaten
Het histopathologisch aspect van ontstoken voetzolen onthulde het klassieke kader van een typische vroege acute ontsteking: oedeem en celinfiltraat dat overeenkomt met 2/3 van PMN cellen en 1/3 mononucleaire cellen. Gezien de statistische behandeling binnen de groep kon echter het bestaan van verschillende patronen van ontwikkeling van het ontstekingsproces in functie van de tijd worden vastgesteld (Tabellen 5 en 6). Er was dus de noodzaak om deze patronen te systematiseren en te classificeren alvorens de effecten van Arnica montana 6cH te analyseren.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| amean ± standaardafwijking; millimeters. bmean ± standaardafwijking; pixels per veld. cmedian and interval; scores toegekend door twee onafhankelijke waarnemers. gemiddelde ± standaardafwijking; cellen per veld. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| amean ± standaardafwijking; millimeters. bmean ± standaardafwijking; pixels per veld. cmedian en interval; scores toegekend door twee onafhankelijke waarnemers. dmean ± standaardafwijking; cellen per veld. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Volgens deze resultaten kon een significant oedeemwerend effect van Arnica montana 6cH alleen worden waargenomen (ANOVA, ) in de subgroep van ratten die een oedeempiek vertoonden tussen 30 en 180 minuten na de injectie van carrageen in de voetzool (de zogenaamde late subgroep) (figuur 1). Ook de histomorfometrische analyse van dia’s gekleurd met Toluidine blauw bleek dat de late subgroep ook minder intense mestcel degranulatie (, ) en een grotere gemiddelde diameter van de lymfevaten (Kruskal-Wallis, ) presenteerde. In plaats daarvan werd in de vroege subgroep (oedeem piek vóór 30 minuten) slechts een discrete maar significante toename van mestcel degranulatie waargenomen (, ), evenals toename van de scores van CD54 expressie door endotheelcellen (Kruskal-Wallis, ) (Tabellen 5 en 6, Figuren 2 en 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogram dat het percentage gedesgranuleerde mestcellen en het lymfatische gebied (pixels) per veld weergeeft. (a) Subgroep die eerder oedeem ontwikkelde; (b) subgroep die later oedeem ontwikkelde. Ten opzichte van controle. **Kruskal-Wallis, in verhouding tot dexamethason groep.
Er werd geen verschil waargenomen tussen groepen en subgroepen wat betreft celmigratie, gezien de PMN-cellen en alle markers die gebruikt werden in de immunohistochemische analyse, inclusief de CD 163+/MAC 387+ cellen ratio (Tabellen 5 en 6, Figuren 3, 4, en 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogram dat het aantal MAC387 positieve cellen per veld weergeeft, de CD163/MAC387-verhouding en het aantal polymorfonucleaire cellen per veld. (a) Subgroep die eerder oedeem ontwikkelde; (b) subgroep die later oedeem ontwikkelde. ANOVA, zonder significantie.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogram dat het aantal CD3- en CD45R-positieve cellen per veld weergeeft. (a) Subgroep die eerder oedeem ontwikkelde; (b) subgroep die later oedeem ontwikkelde. ANOVA, zonder significantie.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogram dat het aantal CD18 (beta 2 integrine) positieve cellen per veld en de mediaan (interval) van de scores van CD54 (ICAM) labeling weergeeft. (a) Subgroep die eerder oedeem ontwikkelde; (b) subgroep die later oedeem ontwikkelde. ANOVA, zonder significantie; *Kruskal-Wallis/Dunn, in verhouding tot controle.
Wanneer alle gegevens samengenomen worden, is het mogelijk de belangrijkste conclusie te illustreren met een spreidingsgrafiek van de oedeemintensiteit, waarin de verschillende trends tussen de groepen en subgroepen te zien zijn, na de behandeling met Arnica montana 6cH (figuur 6). Merk op dat de met Arnica behandelde dieren die laat oedeem vertonen (late subgroep) zich ten opzichte van de andere groepen verplaatsen naar de uitgangswaarde.
(a)
(b)
(a)
(b)
Spreiding plotten tonen verschillende trends van oedeem tijdsevolutie tussen beide subgroepen. De witte punten staan voor controle, de zwarte voor Arnica montana 6cH, en de grijze voor dexamethason. In elke grafiek toont de -as het oedeem op 30 minuten voor de carrageeninjectie en de -as toont het oedeem op het einde van het experiment. LATE = late oedeem subgroep; EARLY = vroege oedeem subgroep. Merk op dat dieren die een late oedeempiek vertoonden en met Arnica montana 6cH werden behandeld, ten opzichte van de andere groepen naar de basislijn zijn verschoven.
Flowchart van de experimentele stappen, waarbij twee subgroepen van ratten volgens de oedeemkinetiek werden bepaald.
4. Discussie
Onder de homeopathische geneesmiddelen die van bijzonder belang zijn bij ontstekingscontrole, is Arnica montana een van de meest bestudeerde. Niettemin zijn er in de recente wetenschappelijke literatuur over homeopathie veel studies die de werkzaamheid ervan trachten aan te tonen, maar weinig werken zijn gewijd aan het begrip van de fysiopathologische veranderingen in weefsels na de blootstelling van dieren aan deze geneesmiddelen . Het is vanuit dit standpunt dat het huidige werk werd opgebouwd; door een gedetailleerde studie van het ontstoken bindweefsel, rekening houdend met de subsets van cellen die ernaartoe migreren, het gedrag van de vaten, en de tijdsafhankelijke dynamiek van dit proces onder de werking van Arnica montana 6cH. Interessant is dat sommige waargenomen effecten in overeenstemming zijn met eerder waargenomen resultaten, zoals de opening van lymfevaten en de daaruit voortvloeiende vermindering van oedeem.
De eerste resultaten die hier werden verkregen wijzen in de richting van een interessant feit: de individuele analyse van elke subgroep toont het belang aan van de tijdelijkheid in het effect van Arnica montana 6cH; dieren die een spontane late oedeempiek vertoonden (na 30 minuten na de injectie van de irriterende stof) waren gevoeliger voor Arnica dan de dieren die een vroege oedeempiek vertoonden (vóór 30 minuten). In dit geval was het oedeem zelfs minder intens dan bij de met dexamethason behandelde groepen en dit feit ging gepaard met een aanzienlijke vermindering van de mestcel degranulatie en een toename van de diameter van de lymfevaten. Beide fenomenen zouden kunnen bijdragen tot de vermindering van macroscopisch oedeem en verschillen van het dexamethasonpatroon, waarbij de oppervlakte van de lymfevaten passief vermindert samen met de oedeemvermindering, zoals blijkt uit figuur 2. Dit effect bevestigt de resultaten die eerder werden waargenomen in .
Carrageen is een polysaccharide verkregen uit het zeewier Chondrus crispus dat de mogelijkheid heeft om lokale ontsteking te induceren, zonder systemische effecten . Het is klassiek bekend dat prostaglandines worden gegenereerd tijdens de oedeemvorming na subcutane carrageen injectie door gemigreerde neutrofielen. De waarneming van het oedeem bestrijdende effect van Arnica montana 6cH uitsluitend bij dieren die het late patroon van acute ontsteking vertoonden, wijst in de richting van de deelname van verschillende chemische mediatoren aan de regulerende routes, zoals eerder aangetoond in . In deze zin moduleren histamine en prostaglandine, mediatoren waarvan de piek van actie optreedt tegen 15-30 minuten, waarschijnlijk dit proces in de late oedeem subgroep, in plaats van mediatoren met een zeer vroegtijdige actie, zoals bradykinine, waarvan de piek ongeveer 10 minuten na het vrijkomen ligt. Experimentele modellen speciaal ontworpen om het belang van individuele variatie in het effect van homeopathische geneesmiddelen aan te tonen, werden reeds eerder beschreven, maar nooit in een ontstekingsprotocol. Individualiteit betekent specificiteit in homeopathische geneesmiddelen; in Rocha 2008 waren alleen de van nature hyperactieve ratten verantwoordelijk voor Rhus toxicodendron 200cH behandeling, met betrekking tot hun gedrag in een open-veld apparaat. Anderzijds stelde Soares 2007 vast dat alleen hypoactieve ratten gevoelig waren voor Bryonia alba 200cH. Deze complementaire studies laten resultaten zien die verenigbaar zijn met de respectievelijke materia medica. De systematische vergelijking van beide studies en andere is te zien in .
Met betrekking tot PMN en mononucleaire leukocyten subtypes cel migratie, werd geen verschil tussen groepen en subgroepen gezien, noch de CD163 +/MAC387 + verhouding toonde een verandering in de dynamiek van macrofaag rijping op de ontstekingsplaats. CD 163 is een transmembraan glycoproteïne type I, van 175 kD, ook gekend als ED2 proteïne. De aanwezigheid ervan is beschreven in het rijpe macrofaagoppervlak, maar ook op een minder intense manier in onrijpe monocyten en andere mononucleaire cellen bij de mens. De expressie van ED 2 is geassocieerd met het ijzermetabolisme en neemt toe tijdens de latere fasen van de ontsteking, omdat positieve cellen een modulerende rol hebben, waarbij autocrien IL wordt vrijgemaakt10 . De aanwezigheid van T- en B-lymfocyten in de ontstekingshaard zou verband kunnen houden met een bepaalde modulerende werking, die in eerdere studies over Arnica montana 6cH werd gesuggereerd, maar hierin niet werd bevestigd.
De expressie van adhesiemoleculen CD 54 (ICAM-1) was groter bij dieren die werden behandeld met Arnica montana 6cH en die een vroeg ontstekingspatroon vertoonden, en werd geassocieerd met een groter percentage gedesgranuleerde mestcellen in het ontstoken weefsel, maar niet met een grotere leukocytenmigratie. Hoewel er geen mechanistische verklaring kon worden gegeven in deze fase van de studie, lijkt het erop dat de globale resultaten zijn opgesplitst in twee hoofdpatronen: die van regulerende vasculaire dynamiek, duidelijk in de late oedeem subgroep, en die van regulerende celgebeurtenissen, duidelijk in de vroege oedeem subgroep, wat wijst op een individueel-afhankelijke kwalitatieve aanpassing van vasculaire en cellulaire ontstekingsgebeurtenissen door Arnica montana 6cH, zoals te zien is in Figuur 6. Deze verschillende patronen van variabiliteit, oscillerend in functie van de vorige toestand van het geteste biologische systeem, werden experimenteel beschreven in andere experimentele contexten met verschillende homeopathische preparaten .
Concluderend kunnen de twee voorgestelde hypothesen worden benadrukt: (a) er is geen selectieve modulatie van leukocyten subsets migratie door Arnica montana 6cH behandeling, maar alleen vasculaire regulaties, met betrekking tot lymfatische absorptie, CD54 expressie, en histamine degranulatie en (b) er is een duidelijke interferentie van de individuele kinetische variatie in vasculaire gebeurtenissen na behandeling met Arnica montana 6cH.
Belangenconflict
Er is geen belangenconflict met betrekking tot dit werk.
Acknowledgments
De auteurs danken CAPES-PROSUP Program en FAPESP Proc. nr. 2007/59661-5 voor de financiële steun; Marcia Gutierrez van Farmacia Sensitiva voor het leveren van medicijnen; Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato, en Lika Osugui voor technische ondersteuning.