- Resumen
- 1. Introducción
- 2. Material y métodos
- 2.1. Animales
- 2.2. Inducción de la inflamación aguda
- 2.3. Grupos y tratamientos
- 2.4. Análisis de los datos
- 2.5. Análisis inmunohistoquímico
- 2.6. Histomorfometría
- 2.7. Análisis estadístico
- 2.8. Criterios Bioéticos
- 3. Resultados
- 4. Discusión
- Conflicto de intereses
- Agradecimientos
Resumen
Se evaluaron los efectos de Arnica montana 6cH en la modulación individual de la cinética de la inflamación aguda en ratas. Se inocularon ratas Wistar macho adultas con carragenina al 1% en la almohadilla de la pata y se trataron con Arnica montana 6cH, dexametasona (4,0 mg/kg; control positivo) o solución hidroalcohólica al 5% (control negativo), por os, cada 15 minutos, entre 30 y 180 minutos después de la inoculación del irritante. Se realizaron procedimientos histopatológicos e inmunohistoquímicos para obtener un panel de células inflamatorias positivas para CD3 (linfocitos T), CD45RA (linfocitos B), CD18 (integrina beta 2), CD163 (proteína ED2), CD54 (ICAM-1) y MAC 387 (monocitos y macrófagos). El tratamiento estadístico de los datos incluyó la clasificación a posteriori de los animales de cada grupo () en dos subgrupos que presentaban edema espontáneo precoz o tardío. Los animales que presentaron edema precoz fueron menos responsables a Arnica montana 6cH en relación con los cambios hemodinámicos. En cambio, las ratas que presentaron edema tardío presentaron un edema menos intenso (), menor porcentaje de degranulación de mastocitos () y aumento del diámetro de los vasos linfáticos (). Los datos sugieren un ajuste cualitativo individual de los eventos vasculares inflamatorios por parte de Arnica montana 6cH.
1. Introducción
Una de las controversias más discutidas sobre la eficacia de los medicamentos homeopáticos es la necesidad de identificar una perfecta analogía sintomática entre el paciente y la patogenia del fármaco, es decir, la necesidad de una prescripción individual según el principio de similitud. Esta particularidad es uno de los retos más difíciles de la investigación científica en este campo debido a la dificultad técnica de su demostración experimental. De hecho, se encuentran pocos estudios experimentales al respecto en la literatura. Así, la demostración experimental de esta particularidad y la comprensión de sus mecanismos pueden ser herramientas útiles para resolver las controversias crónicas sobre la eficacia de la homeopatía, a menudo observadas en los ensayos clínicos . Recientemente, un elegante estudio in vitro demostró la importancia de los mecanismos celulares reguladores y adaptativos en la magnitud de los remedios homeopáticos que inducen efectos citotóxicos sobre las células cancerosas .
Desde 1997 hasta 2008, hemos desarrollado un ensayo de investigación paso a paso sobre los efectos biológicos del Arnica montana homeopático, especialmente el Arnica montana 6cH, utilizando modelos animales . En resumen, los resultados obtenidos en estos estudios muestran que el Arnica montana 6cH es capaz de modular el proceso inflamatorio agudo en ratas, ya que puede aumentar la absorción del edema linfático y el flujo sanguíneo local, así como promover el conjunto de la migración de células polimorfonucleares. Todos estos experimentos se describen cronológicamente en .
El Arnica montana es una planta perteneciente a la familia Compositae que crece en las colinas del este y centro de Europa. En sus hojas, flores y raíces se han identificado varios compuestos activos, como alcoholes, taninos, flavonoides y lactonas sesquirterpénicas, especialmente la helenalina . La principal acción de la helenalina es la inhibición del factor de transcripción NFκβ, de forma similar a los esteroides corticoides . La ingestión accidental de la planta puede provocar vasodilatación, estasis sanguínea, hemorragia, edema y dolor. Estos efectos son los principales temas descritos en la materia médica del Arnica montana . Por ello, el dolor traumático y la absorción de edemas son las principales indicaciones para el uso clínico y experimental de los preparados homeopáticos de Arnica montana . Recientemente, se han propuesto otros usos de Arnica montana altamente diluida, como el uso agronómico de Arnica en las potencias 3, 6 y 12cH para mejorar el crecimiento de las plantas.
El objetivo del presente estudio fue comprobar dos hipótesis: (a) la putativa modulación de los eventos vasculares y celulares en la inflamación aguda por parte de Arnica, centrándose en la tasa de neutrófilos, monocitos, linfocitos T y B presentes en el sitio inflamatorio, y la intensidad de la expresión de las moléculas de adhesión en el tejido conectivo inflamado, utilizando técnicas inmunohistoquímicas e histomorfométricas; (b) la putativa interferencia en las salidas de las variaciones individuales naturales de la cinética de la inflamación.
2. Material y métodos
2.1. Animales
Se utilizaron ratas Wistar adultas de entre 250 y 300 g de peso. Las ratas se mantuvieron en jaulas de polipropileno convencionales de laboratorio (de 5 a 7 animales por jaula), con temperatura controlada (25 ± 3°C) y ciclo de luz (luces encendidas de 06:00 AM a 06:00 PM). Se les ofreció agua y comida ad libitum. Antes de comenzar el experimento, los animales fueron pesados al azar, separados e identificados en tres grupos de 20 ratas cada uno.
2.2. Inducción de la inflamación aguda
El proceso inflamatorio agudo se indujo mediante la inoculación subcutánea de carragenina kappa al 1% (SIGMA) diluida en solución salina estéril en la almohadilla del pie, cuyo grosor se midió previamente con un micrómetro (MYTUTOYO).
Después de 30 y 180 minutos, se realizaron nuevas mediciones, con el fin de evaluar la evolución del edema antes y después del tratamiento en función del tiempo. Así, en los primeros 30 minutos se midió la formación de edema espontáneo y en los 150 minutos restantes se midieron los efectos del fármaco, ya que los tratamientos se realizaron después de la medición de los 30 minutos. A los 180 minutos, se practicó la eutanasia a los animales mediante tracción cervical bajo anestesia profunda, y se recogieron las almohadillas de los pies y se fijaron en formaldehído tamponado al 10% durante 24 horas -como máximo- antes de ser procesadas mediante técnicas histológicas convencionales, incluyendo la incrustación en parafina, la tinción con hematoxilina-eosina y azul de toluidina. Se utilizaron los mismos bloques de parafina para realizar los procedimientos inmunohistoquímicos. Para cada almohadilla del pie, se realizó un único portaobjetos.
2.3. Grupos y tratamientos
Cada grupo de ratas fue tratado con una sustancia específica, según la Tabla 1. Las ratas tratadas con Arnica montana 6cH (experimental) y con una solución hidroalcohólica al 5% no tratada (control negativo) obtenida del mismo proveedor se identificaron mediante códigos, de manera que todos los tratamientos y mediciones se realizaron a ciegas. Estos códigos fueron creados por un técnico de laboratorio que no participó en el estudio y se mantuvieron en una hoja sellada hasta el análisis estadístico, cuando fueron revelados.
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Las ratas tratadas con dexametasona (control positivo) se hicieron abiertamente, debido a las características físicas de la formulación utilizada; era bastante diferente de las homeopáticas y, por tanto, fácilmente reconocible. El tratamiento y el análisis microscópico de las muestras fueron realizados por dos personas independientes, siempre a ciegas. La dosis total de dexametasona utilizada para producir efectos antiinflamatorios fue de 4 mg/kg, según las normas definidas anteriormente. Este protocolo fraccionado fue diseñado para reproducir una condición clínica homeopática habitual de tratamiento de la inflamación aguda y también se utilizó en los estudios anteriores realizados por nuestro grupo . Se eligió la dexametasona como grupo de control positivo porque su mecanismo de acción imita el de la helenalina, el principal principio activo de Arnica montana .
El Arnica montana 6cH comercial fue preparado en solución hidroalcohólica al 5% por una farmacia certificada por la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (ANVISA), Farmácia Sensitiva, São Paulo. Las técnicas utilizadas en la preparación estuvieron de acuerdo con la Farmacopea Homeopática Brasileña, 2ª Edición, 1997.
2.4. Análisis de los datos
Después del primer trazado de la intensidad del edema obtenida durante el período de pretratamiento (de cero a 30 minutos), los datos fueron clasificados en orden creciente utilizando un software Excel 2003, de manera que fuera posible dividir, para cada grupo, las 10 ratas (50%) que presentaron espontáneamente menor intensidad de edema y las 10 ratas (50%) que presentaron mayor intensidad de edema. Así, se formaron dos subgrupos de 10 animales para cada grupo experimental, caracterizando dos subpoblaciones de ratas diferentes según el patrón cinético inflamatorio (Tabla 2). Todo el diseño experimental se explica en un diagrama de flujo (Figura 7).
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Dado que la curva clásica del edema inducido por carragenina se prolonga hasta 6 horas después de la inoculación, la elección de ambos tiempos (30 y 180 minutos) se basó en su meseta conocida . Además, estudios anteriores sobre los efectos del árnica 6cH sobre el edema inducido por carragenina no muestran más efectos después de este período . La cinética de evaluación del proceso inflamatorio después de la inyección de carragenina es un modelo experimental clásico desarrollado durante los años 70. Por lo tanto, es un criterio de confianza para ser utilizado en este caso.
Después de trazar los datos (Figuras 1(a) y 1(b)), ambos patrones cinéticos se hicieron fáciles de identificar: (a) los animales que presentaron un edema menos intenso durante los primeros 30 minutos de pretratamiento tuvieron el pico entre los 30 y los 180 minutos (denominados edema tardío) y (b) los que presentaron un edema más intenso en los primeros 30 minutos disminuyeron después de este periodo (denominados edema temprano).
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Edema (mm) en diferentes grupos y subgrupos. (a) Evolución del edema en función del tiempo en el subgrupo de edema temprano; (b) evolución del edema en función del tiempo en el subgrupo de edema tardío; (c) intensidad del edema al final del experimento en el subgrupo de edema temprano; (d) intensidad del edema al final del experimento en el subgrupo de edema tardío. ; ANOVA, Tuckey-Krammer, en relación con el control. Los valores representan la media ± desviación estándar.
Todos los resultados se compararon entre los seis subgrupos. Esta selección a posteriori se realizó para comprobar el papel de la idiosincrasia individual en el efecto del árnica según el principio de similitud, ya que la velocidad de remisión del edema es uno de los síntomas más conocidos del árnica montana descritos en la materia médica.
2.5. Análisis inmunohistoquímico
Todos los portaobjetos se lavaron con una solución de alcohol-éter 1 : 1 durante cinco minutos y luego se secaron con una hoja de papel suave y se trataron con poli-L-lisina (SIGMA) 1 : 10. A continuación, se transfirieron a su superficie rodajas de tejido embebidas en parafina de 5 micras utilizando un baño histológico a 40°C. A continuación, los cortes se desparafinaron mediante dos baños en xilol absoluto durante 2 minutos y dos baños en alcohol absoluto durante 3 minutos. A continuación, se lavaron los portaobjetos en agua corriente.
Para los procedimientos de inmunohistoquímica, se realizó un primer paso para la recuperación de antígenos mediante el tratamiento térmico de las muestras. Los portaobjetos se colocaron dentro de un baño de tampón de citrato (SIGMA), pH = 6,0, que contenía 0,5% de tween 20 (DAKO), y se calentaron en una olla eléctrica a 80°C (PANASONIC) durante 20 minutos. Después, los portaobjetos se lavaron en PBS, pH = 7,2 (SIGMA), durante 6 minutos y se secaron con un papel absorbente suave, y la muestra de tejido se delimitó utilizando un bolígrafo adecuado (Pap-pen, AbCam).
La actividad de la peroxidasa endógena se bloqueó incubando los tejidos en una solución de H2O2 al 3% diluida en metanol (ISOFAR), durante 15 minutos a temperatura ambiente. A continuación, se lavaron en PBS (SIGMA) durante 6 minutos y se trataron con suero normal de caballo al 2,5% (VECTOR) durante 20 minutos a 25°C, para bloquear los sitios inespecíficos de unión a proteínas. Inmediatamente después de este paso, los tejidos se trataron con el anticuerpo primario (véanse las diluciones y especificaciones en la Tabla 3) y se dejaron en reposo durante toda la noche a 4°C en una cámara húmeda. Todas las diluciones de anticuerpos primarios se hicieron en albúmina de suero bovino (BSA) al 1%.
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Al día siguiente, los cortes se lavaron en PBS (sigma) durante 6 minutos y se trataron con el anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa polimérica (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR), a 25°C durante 30 minutos. Tras un nuevo lavado en PBS (6 minutos), se expusieron a DAB (DAKO) durante 3 segundos, se lavaron de nuevo en agua del grifo, se tiñeron con hematoxilina Harris (01 minuto) y se montaron.
2.6. Histomorfometría
Para la evaluación del porcentaje de degranulación de los mastocitos, se contaron doscientas células por portaobjetos teñidas por el método del azul de toluidina, utilizando campos contiguos, diferenciando los degranulados de los no degranulados. Para evaluar el diámetro de los vasos linfáticos, se evaluaron cinco campos elegidos al azar utilizando un objetivo de 200 x. Se realizaron fotomicrografías de cada campo (CANNON), y se determinó el porcentaje de área de vasos linfáticos por campo mediante un sistema de análisis digital de imágenes (Image Tool 3.0). El diámetro de los vasos linfáticos puede considerarse un buen parámetro para evaluar la absorción del edema linfático, según observaciones anteriores. Como el protocolo era sobre eventos agudos, no se consideró la hipótesis de la linfangiogénesis.
Para los marcadores anti-CD45RA, CD3, CD18, CD163 y MAC 387, se observaron diez campos microscópicos elegidos al azar por portaobjetos, utilizando objetivo de inmersión (magnitud 1000 x). Incluyeron casi todos los tejidos conectivos vasculares subcutáneos de la almohadilla, y se registró el número de células positivas por campo. En el caso del Anti-MAC 387, sólo se consideraron las células mononucleares positivas. Se utilizaron los portaobjetos teñidos con hematoxilina-eosina para contar el número de células PMN por campo. En este caso, el reconocimiento de las células se hizo únicamente por criterios morfológicos. La expresión de CD163 es proporcional a la maduración de los macrófagos, por lo que estos resultados se expresaron como la relación entre CD163/MAC 387 células mononucleares positivas por campo.
Para el Anti-CD54, la intensidad de la positividad en la superficie de las células endoteliales se evaluó mediante un sistema de puntuación, que variaba de 1 a 4. Se evaluaron cinco campos elegidos al azar por portaobjetos, utilizando objetivo de inmersión (magnitud 1000 x), y las puntuaciones fueron realizadas por dos observadores independientes, de forma ciega, para evitar la interpretación subjetiva en el análisis. La puntuación final de cada portaobjetos fue igual a la suma de las puntuaciones parciales. Los criterios de calificación de las puntuaciones se representan en la Tabla 4.
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2.7. Análisis estadístico
En primer lugar se empleó la prueba de Bartlett para determinar la distribución gaussiana de la mayoría de los puntos de datos. A continuación, se realizó el ANOVA/Tuckey-Krammer o Kruskall-Wallis/Dunn, según los resultados de Bartlett. La evaluación de la degranulación de los mastocitos, en cambio, se evaluó mediante una prueba. Los valores de se consideraron significativos. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el programa informático INSTAT 3.
En relación con el edema, también se realizó un análisis estadístico adicional intragrupo, y la comparación de la intensidad del edema entre los subgrupos a los 30 minutos (edema espontáneo) reveló diferencias significativas (Tuckey-Krammer, ), validando el diseño experimental propuesto.
2.8. Criterios Bioéticos
El protocolo fue aprobado por el Comité de Bioética de la Universidad Paulista (protocolo 011/07), de acuerdo con la ley del Estado de São Paulo nº 11.977/05 (Código de protección de los animales del Estado de São Paulo, Brasil). Este procedimiento está de acuerdo con el Convenio Europeo para la Protección de los Animales Vertebrados utilizados para fines experimentales y otros fines científicos y su apéndice.
3. Resultados
El aspecto histopatológico de las almohadillas inflamadas reveló el marco clásico de una típica inflamación aguda temprana: edema e infiltrado celular correspondiente a 2/3 de células PMN y 1/3 de células mononucleares. Sin embargo, teniendo en cuenta el tratamiento estadístico intragrupo, se pudo identificar la existencia de diferentes patrones de desarrollo del proceso inflamatorio en función del tiempo (Tablas 5 y 6). Por lo tanto, existía la necesidad de sistematizar y clasificar estos patrones antes de analizar los efectos de Arnica montana 6cH.
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| ammedia ± desviación estándar; milímetros. bmedia ± desviación estándar; píxeles por campo. media e intervalo; puntuaciones atribuidas por dos observadores independientes. media ± desviación estándar; células por campo. |
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| ammedia ± desviación estándar; milímetros. bmedia ± desviación estándar; píxeles por campo. media e intervalo; puntuaciones atribuidas por dos observadores independientes. media ± desviación estándar; celdas por campo. |
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De acuerdo con ello, se pudo observar un efecto antiedematoso significativo de Arnica montana 6cH (ANOVA, ) sólo en el subgrupo de ratas que presentaron el pico de edema entre 30 y 180 minutos después de la inyección de carragenina en la almohadilla del pie (denominado subgrupo tardío) (Figura 1). Asimismo, el análisis histomorfométrico de los portaobjetos teñidos con azul de toluidina reveló que el subgrupo tardío también presentó una degranulación menos intensa de los mastocitos (, ) y un mayor diámetro medio de los vasos linfáticos (Kruskal-Wallis, ). En cambio, en el subgrupo precoz (pico de edema antes de los 30 minutos), sólo se observó un aumento discreto pero significativo de la degranulación de los mastocitos (, ), así como un aumento de las puntuaciones de la expresión de CD54 por parte de las células endoteliales (Kruskal-Wallis, ) (Tablas 5 y 6, Figuras 2 y 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
.
Histograma que representa el porcentaje de mastocitos degranulados y el área linfática (píxeles) por campo. (a) Subgrupo que desarrolló un edema más temprano; (b) subgrupo que desarrolló un edema más tardío. , en relación con el control. **Kruskal-Wallis, en relación con el grupo de dexametasona.
No se observaron diferencias entre los grupos y subgrupos en cuanto a la migración celular, teniendo en cuenta las células PMN y todos los marcadores utilizados en el análisis inmunohistoquímico, incluida la proporción de células CD 163+/MAC 387+ (Tablas 5 y 6, Figuras 3, 4 y 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Histograma que representa el número de células MAC387 positivas por campo, la relación CD163/MAC387 y el número de células polimorfonucleares por campo. (a) Subgrupo que desarrolló un edema más temprano; (b) subgrupo que desarrolló un edema más tardío. ANOVA, sin significación.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histograma que representa el número de células CD3 y CD45R positivas por campo. (a) Subgrupo que desarrolló un edema más temprano; (b) subgrupo que desarrolló un edema más tardío. ANOVA, sin significación.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histograma que representa el número de células CD18 (integrina beta 2) positivas por campo y la mediana (intervalo) de las puntuaciones del etiquetado CD54 (ICAM). (a) Subgrupo que desarrolló un edema más temprano; (b) subgrupo que desarrolló un edema más tardío. ANOVA, sin significación; *Kruskal-Wallis/Dunn, en relación con el control.
Tomando todos los datos en conjunto, es posible ilustrar la conclusión principal mediante un gráfico de dispersión de la intensidad del edema, en el que pueden verse las diferentes tendencias entre los grupos y subgrupos, tras el tratamiento con Arnica montana 6cH (Figura 6). Obsérvese que los animales tratados con Arnica y que presentan edema tardío (subgrupo tardío) están desplazados a la línea de base en relación con los otros grupos.
(a)
(b)
(a)
(b)
Planificación de la dispersión que muestra diferentes tendencias de la evolución del tiempo de edema entre ambos subgrupos. Los puntos blancos representan el control, los negros el Arnica montana 6cH y los grises la dexametasona. En cada gráfico, el eje – muestra el edema a los 30 minutos antes de la inyección de carragenina y el eje – muestra el edema al final del experimento. LATE = subgrupo de edema tardío; EARLY = subgrupo de edema temprano. Obsérvese que los animales que presentaron un pico de edema tardío y fueron tratados con Arnica montana 6cH están desplazados a la línea de base en relación con los otros grupos.
Filograma de los pasos experimentales, determinando dos subgrupos de ratas según la cinética del edema.
4. Discusión
Entre los medicamentos homeopáticos que tienen especial interés en el control de la inflamación , Arnica montana es uno de los más estudiados . Sin embargo, en la literatura científica reciente sobre homeopatía, hay muchos estudios que buscan demostrar la eficacia de su efecto, pero pocos trabajos se dedican a la comprensión de los cambios fisiopatológicos en los tejidos después de la exposición de los animales a estos medicamentos . Es desde este punto de vista que se construyó el presente trabajo; a través de un estudio detallado del tejido conectivo inflamado, considerando los subconjuntos de células que migran a él, el comportamiento de los vasos, y la dinámica dependiente del tiempo de este proceso bajo la acción de Arnica montana 6cH. Curiosamente, algunos efectos observados concuerdan con los resultados observados anteriormente, como la apertura de los vasos linfáticos y la consiguiente reducción del edema.
Los primeros resultados obtenidos aquí apuntan hacia un hecho interesante: el análisis individual de cada subgrupo muestra la importancia de la temporalidad en el efecto de Arnica montana 6cH; los animales que presentaron un pico tardío de edema espontáneo (después de 30 minutos de la inyección del irritante) fueron más sensibles a Arnica que los animales que presentaron un pico temprano de edema (antes de 30 minutos). En este caso, el edema fue incluso menos intenso que en los grupos de control y tratados con dexametasona, y este hecho fue concomitante con la reducción significativa de la degranulación de los mastocitos y el aumento del diámetro de los vasos linfáticos. Ambos fenómenos podrían contribuir a la reducción del edema macroscópico y difieren de la pauta de la dexametasona, en la que el área de los vasos linfáticos se reduce pasivamente junto con la reducción del edema, como se muestra en la figura 2. Este efecto corrobora los resultados observados previamente en .
El carragenano es un polisacárido obtenido del alga Chondrus crispus que tiene la capacidad de inducir inflamación local, sin efectos sistémicos . Se sabe clásicamente que las prostaglandinas se generan durante la formación del edema después de la inyección subcutánea de carragenina por los neutrófilos migrados . La observación del efecto antiedematoso de Arnica montana 6cH exclusivamente en animales que presentaban el patrón tardío de inflamación aguda apunta hacia la participación de diferentes mediadores químicos en las vías de control, como se ha demostrado anteriormente en . En este sentido, la histamina y la prostaglandina, mediadores cuyo pico de acción se produce hacia los 15-30 minutos, probablemente modulan este proceso en el subgrupo de edema tardío, en lugar de mediadores con una acción muy precoz, como la bradiquinina, cuyo pico se produce unos 10 minutos después de la liberación.
Los modelos experimentales diseñados especialmente para demostrar la importancia de la variación individual en el efecto del medicamento homeopático ya se describieron antes , pero nunca en un protocolo de inflamación. Individualidad significa especificidad en la medicina homeopática; en Rocha 2008 , sólo las ratas naturalmente hiperactivas fueron responsables al tratamiento con Rhus toxicodendron 200cH, en cuanto a su comportamiento en un dispositivo de campo abierto. Por otro lado, Soares 2007 observó que sólo las ratas hipoactivas fueron responsables de Bryonia alba 200cH. Estos estudios complementarios muestran resultados compatibles con la respectiva materia médica. La comparación sistemática de ambos estudios y otros se ve en .
Respecto a la migración celular de los subtipos de PMN y leucocitos mononucleares, no se observó ninguna diferencia entre los grupos y subgrupos, ni la relación CD163+/MAC387+ reveló ningún cambio en la dinámica de maduración de los macrófagos en el sitio inflamatorio. El CD 163 es una glicoproteína transmembrana tipo I, de 175 kD, también conocida como proteína ED2. Se ha descrito su presencia en la superficie de los macrófagos maduros, pero también de forma menos intensa en monocitos inmaduros y otras células mononucleares en humanos. La expresión de ED 2 está asociada al metabolismo del hierro y aumenta durante las fases posteriores de la inflamación, ya que las células positivas tienen un papel modulador, liberando IL10 autocrina. La presencia de linfocitos T y B en el foco inflamatorio podría estar relacionada con una cierta acción moduladora , que ha sido sugerida en estudios previos sobre Arnica montana 6cH , pero no confirmada aquí.
La expresión de las moléculas de adhesión CD 54 (ICAM-1) fue mayor en los animales tratados con Arnica montana 6cH que presentaban un patrón temprano de inflamación y se asoció a un mayor porcentaje de mastocitos degranulados en el tejido inflamado, pero no a una mayor migración leucocitaria. Aunque no se pudo hacer una explicación mecanicista en este paso del estudio, parece que los resultados globales se dividen en dos patrones principales: los de regulación de la dinámica vascular, evidentes en el subgrupo de edema tardío, y los de regulación de los eventos celulares, evidentes en el subgrupo de edema temprano, lo que sugiere un ajuste cualitativo dependiente del individuo de los eventos de inflamación vascular y celular por parte del Arnica montana 6cH, como se ve en la Figura 6. Estos diferentes patrones de variabilidad, que oscilan según el estado previo del sistema biológico probado, han sido descritos experimentalmente en otros contextos experimentales con diferentes preparados homeopáticos.
En conclusión, podrían destacarse las dos hipótesis propuestas (a) no existe una modulación selectiva de la migración de subconjuntos de leucocitos por el tratamiento con Arnica montana 6cH, sino únicamente regulaciones vasculares, en relación con la absorción linfática, la expresión de CD54 y la degranulación de la histamina y (b) existe una clara interferencia de la variación cinética individual en los eventos vasculares tras el tratamiento con Arnica montana 6cH.
Conflicto de intereses
No existe ningún conflicto de intereses relacionado con este trabajo.
Agradecimientos
Los autores agradecen al Programa CAPES-PROSUP y al FAPESP Proc. no. 2007/59661-5 por el apoyo financiero; a Marcia Gutiérrez de Farmacia Sensitiva por el suministro de medicamentos; a Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato y Lika Osugui por el apoyo técnico.