Modulation du processus inflammatoire par l’homéopathique Arnica montana 6CH : le rôle de la variation individuelle

Abstract

Les effets d’Arnica montana 6cH sur la modulation individuelle de la cinétique de l’inflammation aiguë chez le rat ont été évalués. Des rats Wistar mâles adultes ont été inoculés avec 1% de carraghénane dans le coussinet plantaire et traités avec Arnica montana 6cH, dexaméthasone (4,0 mg/kg ; contrôle positif) ou une solution hydroalcoolique à 5% (contrôle négatif), per os, chaque 15 minutes, entre 30 et 180 minutes après l’inoculation de l’irritant. Des procédures histopathologiques et immunohistochimiques ont été effectuées afin d’obtenir un panel de cellules positives inflammatoires pour CD3 (lymphocytes T), CD45RA (lymphocytes B), CD18 (intégrine bêta 2), CD163 (protéine ED2), CD54 (ICAM-1) et MAC 387 (monocytes et macrophages). Le traitement statistique des données comprenait une classification a posteriori des animaux de chaque groupe () en deux sous-groupes présentant un œdème spontané précoce ou tardif. Les animaux qui présentaient un œdème précoce étaient moins responsables à Arnica montana 6cH par rapport aux changements hémodynamiques. Au contraire, les rats qui présentaient un œdème tardif présentaient un œdème moins intense (), un pourcentage plus faible de dégranulation des mastocytes (), et une augmentation du diamètre des vaisseaux lymphatiques (). Ces données suggèrent un ajustement qualitatif individuel des événements vasculaires inflammatoires par Arnica montana 6cH.

1. Introduction

L’une des controverses les plus discutées concernant l’efficacité des médicaments homéopathiques est la nécessité d’identifier une analogie symptomatique parfaite entre le patient et la pathogénie du médicament, c’est-à-dire la nécessité d’une prescription individuelle selon le principe de similia. Cette caractéristique particulière est l’un des défis les plus difficiles de la recherche scientifique dans ce domaine en raison de la difficulté technique de sa démonstration expérimentale. En effet, peu d’études expérimentales à ce sujet sont trouvées dans la littérature. Ainsi, la démonstration expérimentale de cette particularité et la compréhension de ses mécanismes peuvent être des outils utiles pour résoudre les controverses chroniques sur l’efficacité de l’homéopathie, souvent observées dans les essais cliniques . Récemment, une élégante étude in vitro a démontré l’importance des mécanismes cellulaires régulateurs et adaptatifs dans l’ampleur des effets cytotoxiques des remèdes homéopathiques sur les cellules cancéreuses.

De 1997 à 2008, nous avons développé un essai de recherche étape par étape sur les effets biologiques de l’Arnica montana homéopathique, en particulier l’Arnica montana 6cH, en utilisant des modèles animaux. En résumé, les résultats obtenus dans ces études montrent que l’Arnica montana 6cH est capable de moduler le processus inflammatoire aigu chez le rat, puisqu’il peut augmenter l’absorption de l’œdème lymphatique et le flux sanguin local, ainsi que de favoriser le tableau de la migration des cellules polymorphonucléaires. Toutes ces expériences sont chronologiquement décrites dans .

L’Arnica montana est une plante appartenant à la famille des Composées qui pousse sur les collines d’Europe orientale et centrale. Plusieurs composés actifs sont identifiés dans ses feuilles, ses fleurs et ses racines, tels que des alcools, du tanin, des flavonoïdes et des lactones sesquirterpéniques, notamment l’helénaline . L’action principale de l’helénaline est l’inhibition du facteur de transcription NFκβ, de manière similaire aux stéroïdes corticoïdes . L’ingestion accidentelle de la plante peut provoquer une vasodilatation, une stase sanguine, une hémorragie, un œdème et des douleurs. Ces effets sont les principaux sujets décrits dans la materia medica Arnica montana . Pour cette raison, les douleurs dues aux traumatismes et l’absorption des œdèmes sont les principales indications de l’utilisation clinique et expérimentale des préparations homéopathiques d’Arnica montana . Récemment, d’autres utilisations d’Arnica montana hautement dilué ont été proposées, comme l’utilisation agronomique d’Arnica dans les puissances 3, 6, et 12cH pour améliorer la croissance des plantes .

Le but de la présente étude était de vérifier deux hypothèses : (a) la modulation putative des événements vasculaires et cellulaires dans l’inflammation aiguë par l’Arnica, en se concentrant sur le taux de neutrophiles, monocytes, lymphocytes T et B présents dans le site inflammatoire, et l’intensité de l’expression des molécules d’adhésion dans le tissu conjonctif enflammé, en utilisant des techniques immunohistochimiques et histomorphométriques ; (b) l’interférence putative sur les sorties des variations individuelles naturelles de la cinétique de l’inflammation.

2. matériel et méthodes

2.1. Animaux

Des rats Wistar adultes mâles, pesant entre 250 et 300 g, ont été utilisés. Les rats ont été maintenus dans des cages de laboratoire classiques en polypropylène (5 à 7 animaux par cage), avec une température (25 ± 3°C) et un cycle lumineux (lumières allumées de 06h00 à 06h00) contrôlés. L’eau et la nourriture étaient offertes ad libitum. Avant le début de l’expérience, les animaux ont été pesés au hasard, séparés et identifiés en trois groupes de 20 rats chacun.

2.2. Induction de l’inflammation aiguë

Le processus inflammatoire aigu a été induit par l’inoculation sous-cutanée de 1% de carraghénane kappa (SIGMA) dilué dans du sérum physiologique stérile dans le coussinet plantaire, dont l’épaisseur a été préalablement mesurée avec un micromètre (MYTUTOYO).

Après 30 et 180 minutes, de nouvelles mesures ont été effectuées, afin d’évaluer l’évolution de l’œdème avant et après traitement en fonction du temps. Ainsi, les 30 premières minutes ont mesuré la formation spontanée de l’œdème et les 150 minutes restantes ont mesuré les effets du médicament, puisque les traitements ont été effectués après la mesure de 30 minutes. À 180 minutes, les animaux ont été euthanasiés par traction cervicale sous anesthésie profonde, et les coussinets plantaires ont été récoltés et fixés dans du formaldéhyde tamponné à 10 % pendant 24 heures au maximum avant d’être traités par des techniques histologiques conventionnelles, notamment l’inclusion en paraffine, l’hématoxyline-éosine et la coloration au bleu de toluidine. Les mêmes blocs de paraffine ont été utilisés pour réaliser les procédures immunohistochimiques. Pour chaque coussinet plantaire, une seule lame a été réalisée.

2.3. Groupes et traitements

Chaque groupe de rats a été traité avec une substance spécifique, selon le tableau 1. Les rats traités par Arnica montana 6cH (expérimental) et par une solution hydroalcoolique à 5% non sucrée (contrôle négatif) obtenue auprès du même fournisseur ont été identifiés par des codes, de manière à ce que tous les traitements et mesures soient effectués en aveugle. Ces codes ont été créés par un technicien de laboratoire qui n’a pas participé de l’étude et conservés dans une feuille scellée jusqu’à l’analyse statistique, quand ils ont été révélés.

Les rats traités à la dexaméthasone (contrôle positif) ont été faits ouvertement, en raison des caractéristiques physiques de la formulation utilisée ; elle était assez différente des homéopathiques et, donc, facilement reconnaissable. Le traitement et l’analyse microscopique des échantillons ont été effectués par deux personnes indépendantes, toujours en aveugle. La dose totale de dexaméthasone utilisée pour produire des effets anti-inflammatoires était de 4 mg/kg, selon les normes définies précédemment . Ce protocole fractionné a été conçu pour reproduire une condition clinique homéopathique habituelle de traitement d’une inflammation aiguë et a également été utilisé dans les études précédentes réalisées par notre groupe. La dexaméthasone a été choisie comme groupe témoin positif car son mécanisme d’action imite celui de l’helénaline, le principal principe actif de l’Arnica montana .

L’Arnica montana commercial 6cH a été préparé en solution hydroalcoolique à 5% par une pharmacie certifiée par l’Agence nationale brésilienne de vigilance sanitaire (ANVISA) réglementaire, Farmácia Sensitiva, São Paulo. Les techniques utilisées pour la préparation étaient conformes à la pharmacopée homéopathique brésilienne, 2e édition, 1997.

2.4. Analyse des données

Après le premier tracé de l’intensité de l’œdème obtenu pendant la période de prétraitement (de zéro à 30 minutes), les données ont été classées en ordre croissant à l’aide d’un logiciel Excel 2003, de manière à pouvoir diviser, pour chaque groupe, les 10 rats (50%) qui présentaient une intensité d’œdème spontanément plus faible et les 10 rats (50%) qui présentaient une intensité d’œdème plus élevée. Ainsi, deux sous-groupes de 10 animaux ont été formés pour chaque groupe expérimental, caractérisant deux sous-populations de rats différentes selon le schéma cinétique inflammatoire (tableau 2). L’ensemble du schéma expérimental est expliqué dans un organigramme (figure 7).

Puisque la courbe classique de l’œdème induit par la carragénine se prolonge jusqu’à 6 heures après l’inoculation, le choix des deux temps (30 et 180 minutes) a été basé sur son plateau connu . De plus, des études antérieures sur les effets de l’Arnica 6cH sur l’oedème induit par la carraghénine ne montrent plus d’effets après cette période. La cinétique de l’évaluation du processus inflammatoire après l’injection de carraghénane est un modèle expérimental classique développé dans les années 70. C’est donc un critère fiable à utiliser dans ce cas.

Après avoir tracé les données (Figures 1(a) et 1(b)), les deux modèles cinétiques sont devenus faciles à identifier : (a) les animaux qui ont présenté un œdème moins intense pendant les 30 premières minutes de prétraitement ont eu le pic entre 30 et 180 minutes (nommé œdème tardif) et (b) ceux qui ont présenté un œdème plus intense dans les 30 premières minutes ont diminué après cette période (nommé œdème précoce).

(a)

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(c)
(d)

Figure 1

Oedème (mm) dans différents groupes et sous-groupes. (a) évolution de l’œdème en fonction du temps dans le sous-groupe œdème précoce ; (b) évolution de l’œdème en fonction du temps dans le sous-groupe œdème tardif ; (c) intensité de l’œdème à la fin de l’expérience dans le sous-groupe œdème précoce ; (d) intensité de l’œdème à la fin de l’expérience dans le sous-groupe œdème tardif ; ANOVA, Tuckey-Krammer, par rapport au contrôle. Les valeurs représentent la moyenne ± l’écart-type.

Tous les résultats ont été comparés entre les six sous-groupes. Cette sélection a posteriori a été faite afin de vérifier le rôle de l’idiosyncrasie individuelle dans l’effet de l’Arnica selon le principe de similitude, puisque la vitesse de rémission de l’œdème est l’un des symptômes les plus connus de l’Arnica montana décrits dans la materia medica.

2.5. Analyse immunohistochimique

Toutes les lames ont été lavées avec une solution alcool-éther 1 : 1 pendant cinq minutes, puis séchées avec une feuille de papier doux et traitées avec de la poly-L-lysine 1 : 10 (SIGMA). Ensuite, des tranches de tissus de 5 microns inclus dans de la paraffine ont été transférées à leur surface à l’aide d’un bain histologique à 40°C. Ensuite, les tranches ont été prélevées de la paraffine. Ensuite, les tranches ont été déparaffinées par deux bains dans du xylol absolu pendant 2 minutes et deux bains dans de l’alcool absolu pendant 3 minutes. Les lames ont été, ensuite, lavées à l’eau courante du robinet.

Pour les procédures d’immunohistochimie, une première étape de récupération de l’antigène a été réalisée en utilisant un traitement thermique des échantillons. Les lames ont été placées dans un bain tampon au citrate (SIGMA), pH = 6,0, contenant 0,5% de tween 20 (DAKO), et chauffées dans une marmite électrique à 80°C (PANASONIC) pendant 20 minutes. Après cela, les lames ont été lavées dans du PBS, pH = 7,2 (SIGMA), pendant 6 minutes et séchées avec un papier absorbant doux, et l’échantillon de tissu a été délimité à l’aide d’un stylo approprié (Pap-pen, AbCam).

L’activité peroxydase endogène a été bloquée par incubation des tissus dans une solution de H2O2 à 3% diluée dans du méthanol (ISOFAR), pendant 15 minutes à température ambiante. Ensuite, ils ont été lavés dans du PBS (SIGMA) pendant 6 minutes et traités avec 2,5% de sérum normal de cheval (VECTOR) pendant 20 minutes à 25°C, pour bloquer les sites de liaison non spécifiques des protéines. Immédiatement après cette étape, les tissus ont été traités avec l’anticorps primaire (voir les dilutions et les spécifications dans le tableau 3) et laissés au repos pendant une nuit à 4°C dans une chambre humide. Toutes les dilutions des anticorps primaires ont été réalisées dans de l’albumine de sérum bovin (BSA) à 1%.

Le lendemain, les coupes ont été lavées dans du PBS (sigma) pendant 6 minutes et traitées avec l’anticorps secondaire conjugué à la peroxydase polymère (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR), à 25°C pendant 30 minutes. Après un nouveau lavage dans du PBS (6 minutes), ils ont été exposés au DAB (DAKO) pendant 3 secondes, lavés une nouvelle fois à l’eau du robinet, colorés à l’hématoxyline de Harris (01 minute), et montés.

2.6. Histomorphométrie

Pour l’évaluation du pourcentage de dégranulation des mastocytes, deux cents cellules par lame colorée par la méthode du bleu de Toluidine ont été comptées, en utilisant des champs contigus, en différenciant les dégranulés des non dégranulés. Pour évaluer le diamètre des vaisseaux lymphatiques, cinq champs choisis par hasard ont été évalués à l’aide d’un objectif 200 x. Des photomicrographies de chaque champ ont été réalisées (CANNON), et le pourcentage de surface des vaisseaux lymphatiques par champ a été déterminé par un système d’analyse d’image numérique (Image Tool 3.0). Le diamètre des vaisseaux lymphatiques peut être considéré comme un bon paramètre pour évaluer l’absorption de l’œdème lymphatique, selon des observations précédentes . Le protocole portant sur des événements aigus, l’hypothèse d’une lymphangiogenèse n’a pas été envisagée.

Pour les marqueurs anti-CD45RA, CD3, CD18, CD163 et MAC 387, dix champs microscopiques choisis par hasard ont été observés par lame, à l’aide d’un objectif à immersion (magnitude 1000 x). Ils comprenaient la quasi-totalité des tissus conjonctifs vasculaires sous-cutanés du coussinet, et le nombre de cellules positives par champ a été enregistré. Dans le cas de l’Anti-MAC 387, seules les cellules positives mononucléaires ont été considérées. Les lames colorées à l’hématoxyline-éosine ont été utilisées pour compter le nombre de cellules PMN par champ. Dans ce cas, la reconnaissance des cellules s’est faite uniquement par des critères morphologiques. L’expression de CD163 est proportionnelle à la maturation des macrophages, pour cette raison, ces résultats ont été exprimés comme le rapport entre CD163/MAC 387 cellules mononucléaires positives par champ.

Pour l’Anti-CD54, l’intensité de la positivité à la surface des cellules endothéliales a été évaluée par un système de score, variant de 1 à 4. Cinq champs choisis par hasard ont été évalués par lame, en utilisant un objectif à immersion (magnitude 1000 x), et les scores ont été réalisés par deux observateurs indépendants, en aveugle, pour éviter toute interprétation subjective dans l’analyse. Le score final de chaque lame était égal à la somme des scores partiels. Les critères de classement des scores sont représentés dans le tableau 4.

Score Description Photomicrographie (objectif 10 x) 1 Marque de la membrane faible et discontinue, magnitude 1000 x. 2 Marque membranaire régulière mais discontinue, magnitude 1000 x. 3 Marque membranaire forte mais discontinue, magnitude 1000 x. 4 Marque membranaire forte et continue, magnitude 1000 x.

Tableau 4

Critères d’attribution des scores pour différents modèles de marquage des cellules endothéliales.

2.7. Analyse statistique

Le test de Bartlett a d’abord été employé pour déterminer la distribution gaussienne de la majorité des points de données. Ensuite, une analyse ANOVA/Tuckey-Krammer ou Kruskall-Wallis/Dunn a été réalisée, en fonction des résultats de Bartlett. L’évaluation de la dégranulation des mastocytes, en revanche, a été évaluée par test. Les valeurs de ont été considérées comme significatives. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées à l’aide du logiciel INSTAT 3.

En ce qui concerne l’œdème, une analyse statistique supplémentaire intragroupe a également été effectuée, et la comparaison de l’intensité de l’œdème entre les sous-groupes à 30 minutes (œdème spontané) a révélé des différences significatives (Tuckey-Krammer, ), validant ainsi le plan expérimental proposé.

2.8. Critères bioéthiques

Le protocole a été approuvé par le comité de bioéthique de l’Universidade Paulista (protocole 011/07), conformément à la loi de l’État de São Paulo n° 11.977/05 (code de protection des animaux de l’État de São Paulo, Brésil). Cette procédure est conforme à la Convention européenne pour la protection des animaux vertébrés utilisés à des fins expérimentales ou à d’autres fins scientifiques et à son annexe.

3. Résultats

L’aspect histopathologique des coussinets plantaires enflammés a révélé le cadre classique d’une inflammation aiguë précoce typique : œdème et infiltrat cellulaire correspondant à 2/3 de cellules PMN et 1/3 de cellules mononucléaires. Cependant, en considérant le traitement statistique intragroupe, l’existence de différents modèles de développement du processus inflammatoire en fonction du temps a pu être identifiée (tableaux 5 et 6). Ainsi, il y avait la nécessité de systématiser et de classer ces modèles avant d’analyser les effets de Arnica montana 6cH.

Selon cela, un effet anti-oedémateux significatif d’Arnica montana 6cH a pu être observé (ANOVA, ) uniquement dans le sous-groupe de rats qui a présenté le pic d’œdème entre 30 et 180 minutes après l’injection de carraghénane dans le coussinet plantaire (appelé sous-groupe tardif) (Figure 1). De plus, l’analyse histomorphométrique des lames colorées au bleu de Toluidine a révélé que le sous-groupe tardif présentait également une dégranulation des mastocytes moins intense (, ) et un diamètre moyen des vaisseaux lymphatiques plus grand (Kruskal-Wallis, ). Au contraire, dans le sous-groupe précoce (pic d’œdème avant 30 minutes), seule une augmentation discrète mais significative de la dégranulation des mastocytes a été observée (, ), ainsi qu’une augmentation des scores d’expression du CD54 par les cellules endothéliales (Kruskal-Wallis, ) (tableaux 5 et 6, figures 2 et 5).

(a)

(b)

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Figure 2

Histogramme représentant le pourcentage de mastocytes dégranulés et la surface lymphatique (pixels) par champ. (a) Sous-groupe ayant développé un œdème plus précoce ; (b) sous-groupe ayant développé un œdème plus tardif. Par rapport au groupe témoin. **Kruskal-Wallis, par rapport au groupe dexaméthasone.

Aucune différence entre les groupes et sous-groupes n’a été observée concernant la migration cellulaire, en considérant les cellules PMN et tous les marqueurs utilisés dans l’analyse immunohistochimique, y compris le rapport cellules CD 163+/MAC 387+ (tableaux 5 et 6, figures 3, 4 et 5).

(a)

(b)

(a)
(b)

Figure 3

Histogramme représentant le nombre de cellules positives MAC387 par champ, le rapport CD163/MAC387 et le nombre de cellules polymorphonucléaires par champ. (a) Sous-groupe ayant développé un œdème plus précoce ; (b) sous-groupe ayant développé un œdème plus tardif. ANOVA, sans signification.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figure 4

Histogramme représentant le nombre de cellules positives CD3 et CD45R par champ. (a) Sous-groupe ayant développé un œdème plus précoce ; (b) sous-groupe ayant développé un œdème plus tardif. ANOVA, sans signification.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figure 5

Histogramme représentant le nombre de cellules positives CD18 (beta 2 intégrine) par champ et la médiane (intervalle) des scores de marquage CD54 (ICAM). (a) Sous-groupe ayant développé un œdème plus précoce ; (b) sous-groupe ayant développé un œdème plus tardif. ANOVA, sans signification ; *Kruskal-Wallis/Dunn, par rapport au contrôle.

En prenant l’ensemble des données, il est possible d’illustrer la conclusion principale par un graphique de dispersion de l’intensité de l’œdème, dans lequel on peut voir les différentes tendances entre les groupes et les sous-groupes, après le traitement par Arnica montana 6cH (Figure 6). Notez que les animaux traités par Arnica et présentant un œdème tardif (sous-groupe tardif) sont déplacés vers la ligne de base par rapport aux autres groupes.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figure 6

Tracé de diffusion montrant différentes tendances de l’évolution temporelle de l’œdème entre les deux sous-groupes. Les points blancs représentent le contrôle, les points noirs représentent Arnica montana 6cH, et les points gris représentent la dexaméthasone. Dans chaque graphique, l’axe – montre l’œdème 30 minutes avant l’injection de carraghénane et l’axe – montre l’œdème à la fin de l’expérience. LATE = sous-groupe d’œdème tardif ; EARLY = sous-groupe d’œdème précoce. Notez que les animaux qui ont présenté un pic d’œdème tardif et qui ont été traités avec Arnica montana 6cH sont déplacés vers la ligne de base par rapport aux autres groupes.

Figure 7

Flowchart des étapes expérimentales, déterminant deux sous-groupes de rats selon la cinétique de l’œdème.

4. Discussion

Parmi les médicaments homéopathiques qui ont un intérêt particulier dans le contrôle de l’inflammation , Arnica montana est l’un des plus étudiés . Néanmoins, dans la littérature scientifique récente sur l’homéopathie, il existe de nombreuses études cherchant à démontrer l’efficacité de son effet, mais peu de travaux sont consacrés à la compréhension des changements physiopathologiques dans les tissus après l’exposition des animaux à ces médicaments . C’est dans cette optique que le présent travail a été construit ; à travers une étude détaillée du tissu conjonctif enflammé, en considérant les sous-ensembles de cellules qui y migrent, le comportement des vaisseaux, et la dynamique en fonction du temps de ce processus sous l’action d’Arnica montana 6cH. Il est intéressant de noter que certains effets observés sont en accord avec les résultats observés précédemment, tels que l’ouverture des vaisseaux lymphatiques et la réduction conséquente de l’œdème.

Les premiers résultats obtenus ici indiquent un fait intéressant : l’analyse individuelle de chaque sous-groupe montre l’importance de la temporalité dans l’effet de l’Arnica montana 6cH ; les animaux qui ont présenté spontanément un pic tardif d’œdème (après 30 minutes de l’injection de l’irritant) étaient plus sensibles à l’Arnica que les animaux qui ont présenté un pic précoce d’œdème (avant 30 minutes). Dans ce cas, l’œdème était encore moins intense que dans les groupes témoins et traités à la dexaméthasone, et ce fait était concomitant avec la réduction significative de la dégranulation des mastocytes et l’augmentation du diamètre des vaisseaux lymphatiques. Ces deux phénomènes pourraient contribuer à la réduction de l’œdème macroscopique et diffèrent du schéma de la dexaméthasone, dans lequel la surface des vaisseaux lymphatiques se réduit passivement en même temps que la réduction de l’œdème, comme le montre la figure 2. Cet effet corrobore les résultats observés précédemment dans .

La carraghénane est un polysaccharide obtenu à partir de l’algue Chondrus crispus qui a la capacité d’induire une inflammation locale, sans effets systémiques . Il est classiquement connu que les prostaglandines sont générées pendant la formation de l’œdème après l’injection sous-cutanée de carraghénane par les neutrophiles qui migrent. L’observation de l’effet anti-œdème d’Arnica montana 6cH exclusivement chez les animaux qui présentaient le schéma tardif de l’inflammation aiguë indique la participation de différents médiateurs chimiques dans les voies de contrôle, comme cela a été démontré auparavant chez . En ce sens, l’histamine et la prostaglandine, médiateurs dont le pic d’action se situe vers 15-30 minutes, modulent probablement ce processus dans le sous-groupe d’œdème tardif, au lieu de médiateurs à l’action très précoce, comme la bradykinine, dont le pic se situe environ 10 minutes après la libération .

Des modèles expérimentaux spécialement conçus pour démontrer l’importance de la variation individuelle dans l’effet du médicament homéopathique ont déjà été décrits avant , mais jamais dans un protocole d’inflammation. L’individualité est synonyme de spécificité en médecine homéopathique ; dans Rocha 2008 , seuls les rats naturellement hyperactifs étaient responsables du traitement Rhus toxicodendron 200cH, en ce qui concerne leur comportement dans un dispositif en champ libre. D’autre part, Soares 2007 a observé que seuls les rats hypoactifs étaient responsables du traitement par Bryonia alba 200cH. Ces études complémentaires montrent des résultats compatibles avec les materia medica respectives. La comparaison systématique de ces deux études et d’autres est vue dans .

En ce qui concerne la migration cellulaire des sous-types de PMN et de leucocytes mononucléaires, aucune différence entre les groupes et sous-groupes n’a été observée, et le rapport CD163+/MAC387+ n’a révélé aucun changement dans la dynamique de maturation des macrophages dans le site inflammatoire. Le CD 163 est une glycoprotéine transmembranaire de type I, de 175 kD, également connue sous le nom de protéine ED2. Sa présence a été décrite à la surface des macrophages matures, mais aussi de manière moins intense dans les monocytes immatures et autres cellules mononucléaires chez l’homme. L’expression de la protéine ED2 est associée au métabolisme du fer et augmente au cours des dernières phases de l’inflammation, car les cellules positives jouent un rôle modulateur en libérant de l’IL10 autocrine. La présence de lymphocytes T et B dans le site inflammatoire pourrait être liée à une certaine action modulatrice , ce qui a été suggéré dans des études antérieures sur Arnica montana 6cH , mais non confirmé ici.

L’expression des molécules d’adhésion CD 54 (ICAM-1) était plus importante chez les animaux traités par Arnica montana 6cH qui présentaient un modèle précoce d’inflammation et était associée à un plus grand pourcentage de mastocytes dégranulés dans le tissu enflammé, mais pas à une plus grande migration des leucocytes. Bien qu’aucune explication mécaniste n’ait pu être faite à ce stade de l’étude, il semble que les résultats globaux soient divisés en deux schémas principaux : ceux de la régulation de la dynamique vasculaire, évidents dans le sous-groupe des œdèmes tardifs, et ceux de la régulation des événements cellulaires, évidents dans le sous-groupe des œdèmes précoces, suggérant un ajustement qualitatif dépendant de l’individu des événements d’inflammation vasculaire et cellulaire par Arnica montana 6cH, comme le montre la Figure 6. Ces différents modèles de variabilité, oscillant en fonction de l’état antérieur du système biologique testé, ont été décrits expérimentalement dans d’autres contextes expérimentaux avec différentes préparations homéopathiques .

En conclusion, les deux hypothèses proposées pourraient être mises en évidence : (a) il n’y a pas de modulation sélective de la migration des sous-ensembles de leucocytes par le traitement à l’Arnica montana 6cH, mais seulement des régulations vasculaires, concernant l’absorption lymphatique, l’expression du CD54 et la dégranulation de l’histamine et (b) il y a une interférence claire de la variation cinétique individuelle des événements vasculaires après le traitement à l’Arnica montana 6cH.

Conflit d’intérêts

Il n’y a pas de conflit d’intérêts lié à ce travail.

Remerciements

Les auteurs remercient le programme CAPES-PROSUP et FAPESP Proc. no. 2007/59661-5 pour le soutien financier ; Marcia Gutierrez de Farmacia Sensitiva pour la fourniture de médicaments ; Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato, et Lika Osugui pour le soutien technique.