Abstract
Die Auswirkungen von Arnica montana 6cH auf die individuelle Modulation der akuten Entzündungskinetik bei Ratten wurden untersucht. Ausgewachsene männliche Wistar-Ratten wurden mit 1%igem Carrageenan in den Fußballen geimpft und mit Arnica montana 6cH, Dexamethason (4,0 mg/kg; positive Kontrolle) oder 5%iger hydroalkoholischer Lösung (negative Kontrolle), per os, jeweils 15 Minuten lang, zwischen 30 und 180 Minuten nach der Reizinokulation behandelt. Es wurden histopathologische und immunhistochemische Verfahren durchgeführt, um ein Panel von entzündungspositiven Zellen für CD3 (T-Lymphozyten), CD45RA (B-Lymphozyten), CD18 (Beta-2-Integrin), CD163 (ED2-Protein), CD54 (ICAM-1) und MAC 387 (Monozyten und Makrophagen) zu erhalten. Die statistische Auswertung der Daten umfasste eine nachträgliche Klassifizierung der Tiere jeder Gruppe () in zwei Untergruppen mit spontanem frühzeitigem oder spätem Ödem. Tiere, die ein frühzeitiges Ödem aufwiesen, reagierten weniger auf Arnica montana 6cH in Bezug auf hämodynamische Veränderungen. Stattdessen zeigten Ratten, die ein spätes Ödem aufwiesen, ein weniger starkes Ödem (), einen geringeren Prozentsatz an Mastzelldegranulation () und eine Zunahme des Durchmessers der Lymphgefäße (). Die Daten deuten auf eine individuelle qualitative Anpassung der entzündlichen Gefäßereignisse durch Arnica montana 6cH hin.
1. Einleitung
Eine der am meisten diskutierten Kontroversen über die Wirksamkeit homöopathischer Arzneimittel ist die Notwendigkeit einer perfekten symptomatischen Analogie zwischen Patient und Arzneipathogenität, d.h. die Notwendigkeit einer individuellen Verschreibung nach dem Similia-Prinzip. Diese Besonderheit ist eine der schwierigsten Herausforderungen in der wissenschaftlichen Forschung auf diesem Gebiet, da es technisch schwierig ist, sie experimentell nachzuweisen. In der Tat finden sich in der Literatur nur wenige experimentelle Studien dazu. Daher können der experimentelle Nachweis dieser Besonderheit und das Verständnis ihrer Mechanismen nützliche Instrumente sein, um die chronischen Kontroversen über die Wirksamkeit der Homöopathie zu lösen, die häufig bei klinischen Studien auftreten. Kürzlich hat eine elegante In-vitro-Studie die Bedeutung der regulatorischen und adaptiven Zellmechanismen für das Ausmaß der zytotoxischen Wirkungen homöopathischer Mittel auf Krebszellen gezeigt.
Von 1997 bis 2008 haben wir eine schrittweise Forschungsstudie über die biologischen Wirkungen der homöopathischen Arnica montana, speziell der Arnica montana 6cH, an Tiermodellen entwickelt. Zusammenfassend zeigen die Ergebnisse dieser Studien, dass Arnica montana 6cH in der Lage ist, den akuten Entzündungsprozess bei Ratten zu modulieren, da es die lymphatische Ödemabsorption und den lokalen Blutfluss erhöhen kann, sowie die Anordnung der polymorphkernigen Zellmigration zu fördern. Alle diese Experimente sind chronologisch beschrieben in
Die Arnica montana ist eine Pflanze, die zur Familie der Korbblütler gehört und auf den Hügeln Ost- und Mitteleuropas wächst. In ihren Blättern, Blüten und Wurzeln sind verschiedene Wirkstoffe wie Alkohole, Gerbstoffe, Flavonoide und Sesquirterpenlactone, insbesondere Helenalin, enthalten. Die Hauptwirkung von Helenalin ist die Hemmung des Transkriptionsfaktors NFκβ, ähnlich wie bei den Kortikoidsteroiden. Die versehentliche Einnahme der Pflanze kann zu Gefäßerweiterungen, Blutstau, Blutungen, Ödemen und Schmerzen führen. Diese Wirkungen sind die Hauptthemen, die in der Arnica montana materia medica beschrieben werden. Daher sind Schmerzen bei Verletzungen und die Absorption von Ödemen die Hauptindikationen für die klinische und experimentelle Anwendung von homöopathischen Zubereitungen aus Arnica montana . In letzter Zeit wurden auch andere Verwendungen von hoch verdünnter Arnica montana vorgeschlagen, wie die agronomische Verwendung von Arnica in den Potenzen 3, 6 und 12cH zur Verbesserung des Pflanzenwachstums.
Das Ziel der vorliegenden Studie war es, zwei Hypothesen zu überprüfen: (a) die mutmaßliche Modulation von Gefäß- und Zellereignissen bei akuten Entzündungen durch Arnika, wobei der Schwerpunkt auf der Rate von Neutrophilen, Monozyten, T- und B-Lymphozyten im Entzündungsgebiet und der Intensität der Expression von Adhäsionsmolekülen im entzündeten Bindegewebe lag, unter Verwendung immunhistochemischer und histomorphometrischer Techniken; (b) die mutmaßliche Beeinflussung der Ergebnisse der natürlichen individuellen Variationen der Entzündungskinetik.
2. Material und Methoden
2.1. Tiere
Männliche erwachsene Wistar-Ratten mit einem Gewicht zwischen 250 und 300 g wurden verwendet. Die Ratten wurden in herkömmlichen Laborkäfigen aus Polypropylen gehalten (5 bis 7 Tiere pro Käfig), mit kontrollierter Temperatur (25 ± 3°C) und Lichtzyklus (Licht an von 06:00 Uhr morgens bis 06:00 Uhr abends). Wasser und Futter wurden ad libitum angeboten. Vor Beginn des Experiments wurden die Tiere nach dem Zufallsprinzip gewogen, getrennt und in drei Gruppen zu je 20 Ratten eingeteilt.
2.2. Induktion der akuten Entzündung
Der akute Entzündungsprozess wurde durch die subkutane Inokulation von 1% Kappa-Carrageen (SIGMA), verdünnt in steriler Kochsalzlösung, in den Fußballen induziert, dessen Dicke zuvor mit einem Mikrometer (MYTUTOYO) gemessen wurde.
Nach 30 und 180 Minuten wurden neue Messungen durchgeführt, um die Entwicklung des Ödems vor und nach der Behandlung in Abhängigkeit von der Zeit zu bewerten. So wurde in den ersten 30 Minuten die spontane Ödembildung gemessen und in den verbleibenden 150 Minuten die Arzneimittelwirkung, da die Behandlungen nach der 30-minütigen Messung durchgeführt wurden. Nach 180 Minuten wurden die Tiere unter tiefer Betäubung am Hals eingeschläfert, und die Fußballen wurden entnommen und in gepuffertem 10 %igem Formaldehyd für maximal 24 Stunden fixiert, bevor sie mit konventionellen histologischen Techniken, einschließlich Paraffineinbettung, Hämatoxylin-Eosin- und Toluidinblaufärbung, bearbeitet wurden. Die gleichen Paraffinblöcke wurden auch für die immunhistochemischen Verfahren verwendet. Für jeden Fußballen wurde ein einziger Objektträger angefertigt.
2.3. Gruppen und Behandlungen
Jede Rattengruppe wurde mit einer bestimmten Substanz behandelt, wie in Tabelle 1 dargestellt. Die Ratten, die mit Arnica montana 6cH (experimentell) und mit einer 5%igen alkoholischen Lösung (Negativkontrolle) desselben Lieferanten behandelt wurden, wurden durch Codes gekennzeichnet, so dass alle Behandlungen und Messungen blind durchgeführt wurden. Diese Codes wurden von einem Labortechniker, der nicht an der Studie teilnahm, erstellt und in einem versiegelten Blatt bis zur statistischen Analyse aufbewahrt, als sie aufgedeckt wurden.
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Die mit Dexamethason behandelten Ratten (Positivkontrolle) wurden aufgrund der physikalischen Eigenschaften der verwendeten Formulierung offen gemacht; sie unterschied sich deutlich von den homöopathischen und war daher leicht zu erkennen. Die Behandlung und die mikroskopische Analyse der Proben wurden von zwei unabhängigen Personen durchgeführt, immer im Blindflug. Die Gesamtdosis an Dexamethason, die zur Erzeugung der entzündungshemmenden Wirkung verwendet wurde, betrug 4 mg/kg, entsprechend den zuvor festgelegten Standards. Dieses fraktionierte Protokoll wurde entwickelt, um eine übliche homöopathische klinische Bedingung für die Behandlung akuter Entzündungen zu reproduzieren, und wurde auch in den früheren Studien unserer Gruppe verwendet. Dexamethason wurde als Positivkontrollgruppe gewählt, da sein Wirkmechanismus dem von Helenalin, dem Hauptwirkstoff von Arnica montana, ähnelt.
Das handelsübliche Arnica montana 6cH wurde in einer 5%igen hydroalkoholischen Lösung von einer Apotheke zubereitet, die von der brasilianischen Nationalen Agentur für sanitäre Überwachung (ANVISA), Farmácia Sensitiva, São Paulo, zertifiziert wurde. Die bei der Zubereitung verwendeten Techniken entsprachen dem brasilianischen homöopathischen Arzneibuch, 2. Auflage, 1997.
2.4. Datenanalyse
Nach der ersten Aufzeichnung der Ödemintensität, die während der Vorbehandlungsperiode (von Null bis 30 Minuten) erhalten wurde, wurden die Daten mit Hilfe der Software Excel 2003 in einer Halbmondanordnung klassifiziert, so dass es möglich war, für jede Gruppe die 10 Ratten (50%), die spontan eine geringere Ödemintensität aufwiesen, und die 10 Ratten (50%), die eine höhere Ödemintensität aufwiesen, zu unterteilen. Auf diese Weise wurden für jede Versuchsgruppe zwei Untergruppen mit je 10 Tieren gebildet, die zwei verschiedene Ratten-Subpopulationen nach dem Entzündungskinetikmuster charakterisierten (Tabelle 2). Der gesamte Versuchsplan wird in einem Flussdiagramm erläutert (Abbildung 7).
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Da die klassische Kurve des Carrageen-induzierten Ödems bis zu 6 Stunden nach der Inokulation anhält, basierte die Wahl der beiden Zeitpunkte (30 und 180 Minuten) auf ihrem bekannten Plateau . Außerdem zeigen frühere Studien über die Wirkung von Arnica 6cH auf das Carrageen-induzierte Ödem keine Wirkung mehr nach diesem Zeitraum. Die Bewertung der Kinetik des Entzündungsprozesses nach der Injektion von Carrageenan ist ein klassisches experimentelles Modell, das in den 70er Jahren entwickelt wurde. Daher ist es ein zuverlässiges Kriterium, das in diesem Fall verwendet werden sollte.
Nach der Aufzeichnung der Daten (Abbildungen 1(a) und 1(b)) waren beide kinetischen Muster leicht zu erkennen: (a) Tiere, die während der ersten 30 Minuten vor der Behandlung ein weniger starkes Ödem aufwiesen, hatten den Peak zwischen 30 und 180 Minuten (als spätes Ödem bezeichnet) und (b) diejenigen, die in den ersten 30 Minuten ein stärkeres Ödem aufwiesen, nahmen nach diesem Zeitraum ab (als frühes Ödem bezeichnet).
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Ödeme (mm) in verschiedenen Gruppen und Untergruppen. (a) Entwicklung des Ödems in Abhängigkeit von der Zeit in der Untergruppe der frühen Ödeme; (b) Entwicklung des Ödems in Abhängigkeit von der Zeit in der Untergruppe der späten Ödeme; (c) Intensität des Ödems am Ende des Experiments in der Untergruppe der frühen Ödeme; (d) Intensität des Ödems am Ende des Experiments in der Untergruppe der späten Ödeme; ANOVA, Tuckey-Krammer, im Verhältnis zur Kontrolle. Die Werte stellen Mittelwert ± Standardabweichung dar.
Alle Ergebnisse wurden zwischen den sechs Untergruppen verglichen. Diese a posteriori Auswahl wurde getroffen, um die Rolle der individuellen Idiosynkrasie bei der Arnica-Wirkung nach dem Similia-Prinzip zu überprüfen, da die Geschwindigkeit der Ödemrückbildung eines der bekanntesten in der Materia Medica beschriebenen Arnica montana-Symptome ist.
2.5. Immunhistochemische Analyse
Alle Objektträger wurden fünf Minuten lang mit einer 1 : 1 Alkohol-Ether-Lösung gewaschen, dann mit einem weichen Blatt Papier getrocknet und mit 1 : 10 Poly-L-Lysin (SIGMA) behandelt. Dann wurden 5 Mikrometer große, in Paraffin eingebettete Gewebeschnitte in einem 40°C warmen histologischen Bad auf die Oberfläche übertragen. Anschließend wurden die Schnitte durch zwei Bäder in absolutem Xylol für 2 Minuten und zwei Bäder in absolutem Alkohol für 3 Minuten entparaffiniert. Die Objektträger wurden dann in Leitungswasser gewaschen.
Für die immunhistochemischen Verfahren wurde in einem ersten Schritt das Antigen durch Wärmebehandlung der Proben gewonnen. Die Objektträger wurden in ein Citratpufferbad (SIGMA), pH = 6,0, mit 0,5 % Tween 20 (DAKO) gelegt und in einem elektrischen Topf bei 80°C (PANASONIC) 20 Minuten lang erhitzt. Danach wurden die Objektträger 6 Minuten lang in PBS, pH = 7,2 (SIGMA), gewaschen und mit einem weichen, saugfähigen Papier getrocknet, und die Gewebeprobe wurde mit einem geeigneten Stift (Pap-pen, AbCam) abgegrenzt.
Die endogene Peroxidase-Aktivität wurde durch 15-minütige Inkubation der Gewebe in einer 3%igen, in Methanol verdünnten H2O2-Lösung (ISOFAR) bei Raumtemperatur blockiert. Anschließend wurden sie 6 Minuten lang in PBS (SIGMA) gewaschen und 20 Minuten lang bei 25°C mit 2,5%igem Pferdenormalserum (VECTOR) behandelt, um unspezifische Proteinbindungsstellen zu blockieren. Unmittelbar nach diesem Schritt wurden die Gewebe mit dem primären Antikörper (siehe Verdünnungen und Spezifikationen in Tabelle 3) behandelt und über Nacht bei 4 °C in einer feuchten Kammer stehen gelassen. Alle Verdünnungen der primären Antikörper wurden in 1% Rinderserumalbumin (BSA) hergestellt.
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Am nächsten Tag wurden die Schnitte 6 Minuten lang in PBS (Sigma) gewaschen und 30 Minuten lang bei 25°C mit dem Polymer-Peroxidase-konjugierten Sekundärantikörper (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR) behandelt. Nach einem erneuten Waschen in PBS (6 Minuten) wurden sie 3 Sekunden lang mit DAB (DAKO) bestrahlt, erneut in Leitungswasser gewaschen, mit Harris-Hämatoxylin gefärbt (01 Minute) und montiert.
2.6. Histomorphometrie
Für die Bewertung des Prozentsatzes der Mastzelldegranulation wurden zweihundert Zellen pro Objektträger mit der Toluidinblau-Methode gefärbt und in zusammenhängenden Feldern gezählt, wobei die degranulierten von den nicht degranulierten Zellen unterschieden wurden. Zur Bewertung des Durchmessers der Lymphgefäße wurden fünf zufällig ausgewählte Felder mit einem 200fach-Objektiv untersucht. Von jedem Feld wurden Mikrofotografien angefertigt (CANNON), und der prozentuale Anteil der Lymphgefäßfläche pro Feld wurde mit einem digitalen Bildanalysesystem (Image Tool 3.0) bestimmt. Der Durchmesser der Lymphgefäße kann nach früheren Beobachtungen als guter Parameter zur Bewertung der Absorption des Lymphödems angesehen werden. Da es in dem Protokoll um akute Ereignisse ging, wurde die Hypothese der Lymphangiogenese nicht berücksichtigt.
Für die Anti-CD45RA-, CD3-, CD18-, CD163- und MAC 387-Marker wurden pro Objektträger zehn zufällig ausgewählte mikroskopische Felder mit einem Immersionsobjektiv (Vergrößerung 1000 x) betrachtet. Sie umfassten fast das gesamte subkutane vaskuläre Bindegewebe des Polsters, und die Anzahl der positiven Zellen pro Feld wurde erfasst. Im Falle von Anti-MAC 387 wurden nur mononukleäre positive Zellen berücksichtigt. Die Hämatoxylin-Eosin-gefärbten Objektträger wurden verwendet, um die Anzahl der PMN-Zellen pro Feld zu zählen. In diesem Fall erfolgte die Erkennung der Zellen nur nach morphologischen Kriterien. Die Expression von CD163 ist proportional zur Makrophagenreifung, daher wurden diese Ergebnisse als Verhältnis zwischen CD163/MAC 387 mononukleären positiven Zellen pro Feld ausgedrückt.
Für das Anti-CD54 wurde die Intensität der Positivität auf der Oberfläche der Endothelzellen durch ein Punktesystem bewertet, das von 1 bis 4 reicht. Fünf zufällig ausgewählte Felder wurden pro Objektträger unter Verwendung eines Immersionsobjektivs (1000-fache Vergrößerung) bewertet, und die Bewertungen wurden von zwei unabhängigen Beobachtern blind vorgenommen, um subjektive Interpretationen bei der Analyse zu vermeiden. Die Endnote für jedes Präparat war gleich der Summe der Teilnoten. Die Kriterien für die Punktevergabe sind in Tabelle 4 dargestellt.
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2.7. Statistische Analyse
Der Bartlett-Test wurde zunächst angewandt, um die Gaußsche Verteilung der meisten Datenpunkte zu bestimmen. Dann wurde entsprechend den Bartlett-Ergebnissen eine ANOVA/Tuckey-Krammer oder Kruskall-Wallis/Dunn durchgeführt. Die Bewertung der Mastzelldegranulation wurde hingegen durch einen Test ausgewertet. Die Werte von wurden als signifikant angesehen. Alle statistischen Analysen wurden mit der Software INSTAT 3 durchgeführt.
In Bezug auf das Ödem wurde auch eine zusätzliche gruppeninterne statistische Analyse durchgeführt, und der Vergleich der Ödemintensität zwischen den Untergruppen nach 30 Minuten (spontanes Ödem) ergab signifikante Unterschiede (Tuckey-Krammer, ), was den vorgeschlagenen Versuchsplan bestätigte.
2.8. Bioethische Kriterien
Das Protokoll wurde vom Bioethikkomitee der Universidade Paulista (Protokoll 011/07) gemäß dem Gesetz des Staates São Paulo Nr. 11.977/05 (Tierschutzgesetz des Staates São Paulo, Brasilien) genehmigt. Dieses Verfahren steht im Einklang mit dem Europäischen Übereinkommen zum Schutz der für Versuche und andere wissenschaftliche Zwecke verwendeten Wirbeltiere und dessen Anhang.
3. Ergebnisse
Die histopathologische Untersuchung der entzündeten Fußsohlen zeigte die klassischen Merkmale einer typischen frühen akuten Entzündung: Ödeme und Zellinfiltrate, die zu 2/3 aus PMN-Zellen und zu 1/3 aus mononukleären Zellen bestehen. Bei der Betrachtung der statistischen Behandlung innerhalb der Gruppe konnten jedoch unterschiedliche Muster der Entwicklung des Entzündungsprozesses in Abhängigkeit von der Zeit festgestellt werden (Tabellen 5 und 6). Es bestand also die Notwendigkeit, diese Muster zu systematisieren und zu klassifizieren, bevor die Wirkungen von Arnica montana 6cH analysiert werden konnten.
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| amMittelwert ± Standardabweichung; Millimeter. bMittelwert ± Standardabweichung; Pixel pro Feld. Mittelwert und Intervall; von zwei unabhängigen Beobachtern zugewiesene Punktzahlen. Mittelwert ± Standardabweichung; Zellen pro Feld. |
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| amMittelwert ± Standardabweichung; Millimeter. bMittelwert ± Standardabweichung; Pixel pro Feld. Mittelwert und Intervall; von zwei unabhängigen Beobachtern vergebene Werte. Mittelwert ± Standardabweichung; Zellen pro Feld. |
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Eine signifikante ödemhemmende Wirkung von Arnica montana 6cH konnte demnach nur in der Untergruppe der Ratten festgestellt werden (ANOVA, ), die den Höhepunkt des Ödems zwischen 30 und 180 Minuten nach der Injektion von Carrageenan in den Fußballen aufwiesen (sogenannte späte Untergruppe) (Abbildung 1). Auch die histomorphometrische Analyse der mit Toluidinblau gefärbten Objektträger ergab, dass die späte Untergruppe auch eine weniger intensive Mastzelldegranulation (, ) und einen größeren durchschnittlichen Durchmesser der Lymphgefäße aufwies (Kruskal-Wallis, ). Dagegen wurde in der frühen Untergruppe (Ödemspitze vor 30 Minuten) nur ein diskreter, aber signifikanter Anstieg der Mastzelldegranulation beobachtet (, ) sowie ein Anstieg der Werte der CD54-Expression durch Endothelzellen (Kruskal-Wallis, ) (Tabellen 5 und 6, Abbildungen 2 und 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogramm, das den Prozentsatz der degranulierten Mastzellen und der lymphatischen Fläche (Pixel) pro Feld darstellt. (a) Untergruppe, die früher ein Ödem entwickelte; (b) Untergruppe, die später ein Ödem entwickelte. im Verhältnis zur Kontrolle. **Kruskal-Wallis, im Verhältnis zur Dexamethason-Gruppe.
Es wurde kein Unterschied zwischen den Gruppen und Untergruppen hinsichtlich der Zellmigration beobachtet, wenn man die PMN-Zellen und alle in der immunhistochemischen Analyse verwendeten Marker berücksichtigt, einschließlich des Verhältnisses CD 163+/MAC 387+ Zellen (Tabellen 5 und 6, Abbildungen 3, 4 und 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogramm, das die Anzahl der MAC387-positiven Zellen pro Feld darstellt, das CD163/MAC387-Verhältnis und die Anzahl der polymorphkernigen Zellen pro Feld. (a) Untergruppe, die früher ein Ödem entwickelte; (b) Untergruppe, die später ein Ödem entwickelte. ANOVA, ohne Signifikanz.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogramm zur Darstellung der Anzahl der CD3- und CD45R-positiven Zellen pro Feld. (a) Untergruppe, die früher ein Ödem entwickelte; (b) Untergruppe, die später ein Ödem entwickelte. ANOVA, ohne Signifikanz.
(a)
(b)
(a)
(b)
Histogramm, das die Anzahl der CD18 (Beta-2-Integrin)-positiven Zellen pro Feld und den Median (Intervall) der Werte für die CD54 (ICAM)-Markierung darstellt. (a) Untergruppe, die früher ein Ödem entwickelte; (b) Untergruppe, die später ein Ödem entwickelte. ANOVA, ohne Signifikanz; *Kruskal-Wallis/Dunn, im Verhältnis zur Kontrolle.
Wenn man alle Daten zusammennimmt, ist es möglich, die Hauptschlussfolgerung durch ein Streudiagramm der Ödemintensität zu veranschaulichen, in dem die unterschiedlichen Tendenzen zwischen den Gruppen und Untergruppen nach der Behandlung mit Arnica montana 6cH zu sehen sind (Abbildung 6). Man beachte, dass die mit Arnica behandelten Tiere, die ein spätes Ödem aufweisen (späte Untergruppe), im Vergleich zu den anderen Gruppen zur Grundlinie verschoben sind.
(a)
(b)
(a)
(b)
Die Streudiagramme zeigen unterschiedliche Trends der Ödemzeitentwicklung zwischen beiden Untergruppen. Die weißen Punkte stehen für die Kontrolle, die schwarzen Punkte für Arnica montana 6cH und die grauen Punkte für Dexamethason. In jeder Grafik zeigt die -Achse das Ödem 30 Minuten vor der Carrageen-Injektion und die -Achse das Ödem am Ende des Experiments. LATE = Untergruppe der späten Ödeme; EARLY = Untergruppe der frühen Ödeme. Man beachte, dass die Tiere, die eine späte Spitze des Ödems aufwiesen und mit Arnica montana 6cH behandelt wurden, im Verhältnis zu den anderen Gruppen zur Grundlinie verschoben sind.
Flussdiagramm der experimentellen Schritte, wobei zwei Untergruppen von Ratten entsprechend der Ödemkinetik bestimmt wurden.
4. Diskussion
Unter den homöopathischen Arzneimitteln, die ein besonderes Interesse an der Entzündungsbekämpfung haben, ist Arnica montana eines der am meisten untersuchten. In der neueren wissenschaftlichen Literatur über die Homöopathie gibt es viele Studien, die die Wirksamkeit ihrer Wirkung nachweisen wollen, aber nur wenige Arbeiten, die sich mit dem Verständnis der physiopathologischen Veränderungen in den Geweben nach der Exposition von Tieren gegenüber diesen Arzneimitteln beschäftigen. Unter diesem Gesichtspunkt wurde die vorliegende Arbeit aufgebaut; durch eine detaillierte Untersuchung des entzündeten Bindegewebes, unter Berücksichtigung der Untergruppen von Zellen, die dorthin wandern, des Verhaltens der Gefäße und der zeitabhängigen Dynamik dieses Prozesses unter der Wirkung von Arnica montana 6cH. Interessanterweise stimmen einige der beobachteten Effekte mit früheren Ergebnissen überein, wie z.B. die Öffnung der Lymphgefäße und die daraus resultierende Verringerung des Ödems.
Die ersten hier erhaltenen Ergebnisse weisen auf eine interessante Tatsache hin: die individuelle Analyse jeder Untergruppe zeigt die Bedeutung der Zeitabhängigkeit der Wirkung von Arnica montana 6cH; Tiere, die einen spontanen späten Höhepunkt des Ödems aufwiesen (nach 30 Minuten nach der Injektion des Reizstoffs), reagierten empfindlicher auf Arnica als die Tiere, die einen frühen Höhepunkt des Ödems aufwiesen (vor 30 Minuten). In diesem Fall war das Ödem sogar weniger stark als in den Kontrollgruppen und den mit Dexamethason behandelten Gruppen, und diese Tatsache ging einher mit einer signifikanten Verringerung der Mastzelldegranulation und einer Zunahme des Durchmessers der Lymphgefäße. Beide Phänomene könnten zur Verringerung des makroskopischen Ödems beitragen und unterscheiden sich vom Dexamethason-Muster, bei dem sich die Fläche der Lymphgefäße zusammen mit der Verringerung des Ödems passiv verringert, wie in Abbildung 2 dargestellt. Dieser Effekt bestätigt die Ergebnisse, die zuvor in
Carrageenan ist ein Polysaccharid, das aus der Meeresalge Chondrus crispus gewonnen wird und die Fähigkeit hat, lokale Entzündungen ohne systemische Wirkungen zu induzieren. Es ist bekannt, dass Prostaglandine während der Ödembildung nach subkutaner Carrageen-Injektion durch migrierte Neutrophile gebildet werden. Die Beobachtung der ödemhemmenden Wirkung von Arnica montana 6cH ausschließlich bei Tieren, die das späte Muster einer akuten Entzündung aufwiesen, deutet auf die Beteiligung verschiedener chemischer Mediatoren an den Kontrollwegen hin, wie zuvor in gezeigt wurde. In diesem Sinne modulieren Histamin und Prostaglandin, Mediatoren, deren Wirkungsspitze gegen 15-30 Minuten auftritt, wahrscheinlich diesen Prozess in der späten Ödem-Untergruppe, im Gegensatz zu Mediatoren mit einer sehr frühen Wirkung, wie Bradykinin, dessen Wirkungsspitze etwa 10 Minuten nach der Freisetzung liegt.
Experimentelle Modelle, die speziell entwickelt wurden, um die Bedeutung der individuellen Variation in der Wirkung von homöopathischen Arzneimitteln zu demonstrieren, wurden bereits vorher beschrieben, aber nie in einem Entzündungsprotokoll. Individualität bedeutet Spezifität in der homöopathischen Medizin; in Rocha 2008 waren nur die von Natur aus hyperaktiven Ratten für die Behandlung mit Rhus toxicodendron 200cH verantwortlich, was ihr Verhalten in einem Freilandgerät betrifft. Andererseits beobachtete Soares 2007, dass nur hypoaktive Ratten auf Bryonia alba 200cH reagierten. Diese komplementären Studien zeigen Ergebnisse, die mit der jeweiligen Materia Medica vereinbar sind.
In Bezug auf die Zellmigration von PMN und mononukleären Leukozyten-Subtypen wurde kein Unterschied zwischen den Gruppen und Untergruppen festgestellt, und auch das CD163+/MAC387+-Verhältnis zeigte keine Veränderung in der Dynamik der Makrophagenreifung im Entzündungsgebiet. CD 163 ist ein Transmembranglykoprotein vom Typ I mit 175 kD, das auch als ED2-Protein bekannt ist. Sein Vorhandensein wurde auf der Oberfläche reifer Makrophagen, aber auch in geringerer Intensität in unreifen Monozyten und anderen mononukleären Zellen beim Menschen beschrieben. Die Expression von ED 2 steht in Zusammenhang mit dem Eisenstoffwechsel und nimmt in den späteren Phasen der Entzündung zu, da positive Zellen eine modulierende Rolle spielen und autokrin IL10 freisetzen. Die Anwesenheit von T- und B-Lymphozyten an der Entzündungsstelle könnte mit einer gewissen Modulatorwirkung zusammenhängen, die in früheren Studien über Arnica montana 6cH vermutet wurde, hier aber nicht bestätigt werden konnte.
Die Expression der Adhäsionsmoleküle CD 54 (ICAM-1) war bei den mit Arnica montana 6cH behandelten Tieren, die ein frühes Entzündungsmuster aufwiesen, größer und stand in Zusammenhang mit einem größeren Prozentsatz degranulierter Mastzellen im entzündeten Gewebe, aber nicht mit einer größeren Leukozytenmigration. Obwohl in diesem Schritt der Studie keine mechanistische Erklärung gegeben werden konnte, scheint es, dass die globalen Ergebnisse in zwei Hauptmuster aufgeteilt sind: die der Regulierung der vaskulären Dynamik, die in der Untergruppe der späten Ödeme deutlich wird, und die der Regulierung der Zellereignisse, die in der Untergruppe der frühen Ödeme deutlich wird, was auf eine individuell abhängige qualitative Anpassung der vaskulären und zellulären Entzündungsereignisse durch Arnica montana 6cH hindeutet, wie in Abbildung 6 zu sehen. Diese unterschiedlichen Muster der Variabilität, die je nach dem vorherigen Zustand des getesteten biologischen Systems oszillieren, wurden in anderen experimentellen Zusammenhängen mit verschiedenen homöopathischen Präparaten beschrieben.
Zusammenfassend können die beiden vorgeschlagenen Hypothesen hervorgehoben werden: (a) es gibt keine selektive Modulation der Migration von Leukozytenuntergruppen durch die Behandlung mit Arnica montana 6cH, sondern nur vaskuläre Regulierungen, was die lymphatische Absorption, die CD54-Expression und die Histamin-Degranulation betrifft, und (b) es gibt eine deutliche Interferenz der individuellen kinetischen Variation der vaskulären Ereignisse nach der Behandlung mit Arnica montana 6cH.
Interessenkonflikt
Es gibt keinen Interessenkonflikt im Zusammenhang mit dieser Arbeit.
Danksagung
Die Autoren danken dem CAPES-PROSUP-Programm und dem FAPESP Proc. Nr. 2007/59661-5 für die finanzielle Unterstützung; Marcia Gutierrez von Farmacia Sensitiva für die Bereitstellung von Medikamenten; Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato und Lika Osugui für technische Unterstützung.