Inflammatorisk procesmodulering med homøopatisk Arnica montana 6CH: Den individuelle variations rolle

Abstract

Effekterne af Arnica montana 6cH på den individuelle modulering af akut inflammationskinetik hos rotter blev evalueret. Voksne Wistar-hanrotter blev inokuleret med 1 % carrageenan i fodballen og behandlet med Arnica montana 6cH, dexamethason (4,0 mg/kg; positiv kontrol) eller 5 % hydroalkoholisk opløsning (negativ kontrol), per os, hver 15 minutter, mellem 30 og 180 minutter efter den irriterende inokulation. Der blev foretaget histopatologiske og immunohistokemiske procedurer for at få et panel af inflammatoriske positive celler for CD3 (T-lymfocytter), CD45RA (B-lymfocytter), CD18 (beta 2-integrin), CD163 (ED2-protein), CD54 (ICAM-1) og MAC 387 (monocytter og makrofager). Den statistiske behandling af dataene omfattede en efterfølgende klassificering af dyr fra hver gruppe () i to undergrupper med spontant tidligt eller sent opstået ødem. Dyr, der præsenterede tidligt opstået ødem, var mindre ansvarlige for Arnica montana 6cH i forhold til hæmodynamiske ændringer. I stedet præsenterede rotter, der udviste sent ødem, mindre intense ødemer (), lavere procentdel af mastcelle-degranulering () og stigning i lymfekardiameteren (). Dataene tyder på en individuelt kvalitativ justering af inflammatoriske vaskulære hændelser ved hjælp af Arnica montana 6cH.

1. Indledning

En af de mest diskuterede kontroverser om effektiviteten af homøopatiske lægemidler er nødvendigheden af at identificere en perfekt symptomatisk analogi mellem patient og lægemiddelpatogenesy, dvs. nødvendigheden af individuel ordination i henhold til similia-princippet. Denne særlige egenskab er en af de vanskeligste udfordringer i den videnskabelige forskning på dette område på grund af den tekniske vanskelighed ved dens eksperimentelle påvisning. Der findes nemlig kun få eksperimentelle undersøgelser herom i litteraturen . Den eksperimentelle påvisning af denne særlige egenskab og forståelsen af dens mekanismer kan således være nyttige redskaber til at løse de kroniske kontroverser om homøopatiens effektivitet, som ofte ses i kliniske forsøg . For nylig viste en elegant in vitro-undersøgelse betydningen af de regulerende og adaptive cellemekanismer for størrelsen af de homøopatiske midler, der inducerer cytotoksiske virkninger på kræftceller .

Fra 1997 til 2008 har vi udviklet et trinvis forskningsforsøg om de biologiske virkninger af homøopatisk Arnica montana, specielt Arnica montana 6cH, ved hjælp af dyremodeller . Kort sagt viser de resultater, der er opnået i disse undersøgelser, at Arnica montana 6cH er i stand til at modulere den akutte inflammatoriske proces hos rotter, da det kan øge lymfødemabsorptionen og den lokale blodgennemstrømning samt fremme arrayet af polymorphonukleære cellers migration. Alle disse forsøg er kronologisk beskrevet i .

Arnica montana er en plante, der tilhører Compositae-familien, og som vokser på bakkerne i Øst- og Centraleuropa. Der er identificeret flere aktive forbindelser i dens blade, blomster og rødder, såsom alkoholer, tannin, flavonoider og sesquirterpenlactoner, især helenalin . Den vigtigste virkning af helenalin er hæmning af transkriptionsfaktoren NFκβ, på samme måde som kortikoidsteroider . Ved tilfældigt indtag af planten kan der opstå vasodilatation, blodstase, blødning, ødemer og smerter. Disse virkninger er de vigtigste emner, der er beskrevet i Arnica montana materia medica . Derfor er traumesmerter og ødemabsorption de vigtigste indikationer for den kliniske og eksperimentelle anvendelse af homøopatiske præparater af Arnica montana . For nylig er der blevet foreslået andre anvendelser af højt fortyndet Arnica montana, som f.eks. agronomisk brug af Arnica i potenserne 3, 6 og 12cH til forbedring af planternes vækst.

Formålet med denne undersøgelse var at kontrollere to hypoteser: (a) den formodede modulering af vaskulære og cellulære hændelser i akut inflammation ved hjælp af Arnica, med fokus på antallet af neutrofiler, monocytter, T- og B-lymfocytter, der er til stede på det inflammatoriske sted, og intensiteten af ekspressionen af adhæsionsmolekyler i betændt bindevæv ved hjælp af immunohistokemiske og histomorfometriske teknikker; (b) den formodede interferens på udgangene af de naturlige individuelle variationer i inflammationskinetikken.

2. Materiale og metoder

2.1. Dyr

Der blev anvendt voksne Wistar-rotter af hankøn, der vejede mellem 250 og 300 g. Rotterne blev holdt i konventionelle laboratoriebure af polypropylen (5 til 7 dyr pr. bur) med kontrolleret temperatur (25 ± 3 °C) og lyscyklus (lys tændt fra 06:00 om morgenen til 06:00 om eftermiddagen). Vand og foder blev tilbudt ad libitum. Inden forsøgets begyndelse blev dyrene tilfældigt vejet, adskilt og identificeret i tre grupper på 20 rotter hver.

2.2. Induktion af akut inflammation

Den akutte inflammatoriske proces blev induceret ved subkutan inokulation af 1% kappa carrageenan (SIGMA) fortyndet i steril saltvand i fodpuden, hvis tykkelse forinden var blevet målt med et mikrometer (MYTUTOYO)

Efter 30 og 180 minutter blev der foretaget nye målinger for at vurdere udviklingen af ødemet før og efter behandlingen i forhold til tiden. De første 30 minutter målte således den spontane ødemdannelse, og de resterende 150 minutter målte lægemiddelvirkningerne, da behandlingerne blev foretaget efter 30-minutters-målingen. Efter 180 minutter blev dyrene aflivet ved cervikal traktion under dyb bedøvelse, og fodpuderne blev udtaget og fikseret i bufferbehandlet 10 % formaldehyd i højst 24 timer, inden de blev behandlet ved hjælp af konventionelle histologiske teknikker, herunder paraffinindlejring, hæmatoxylin-eosin- og toluidinblåfarvning. De samme paraffinblokke blev anvendt til at udføre de immunhistokemiske procedurer. For hver fodplade blev der fremstillet et enkelt objektglas.

2.3. Grupper og behandlinger

Hver gruppe af rotter blev behandlet med et specifikt stof i henhold til tabel 1. Rotter, der blev behandlet med Arnica montana 6cH (eksperimentelt) og ikke-succussed 5% hydroalkoholisk opløsning (negativ kontrol) fra samme leverandør, blev identificeret ved hjælp af koder på en sådan måde, at alle behandlinger og målinger blev foretaget i blind tilstand. Disse koder blev oprettet af en laboratorietekniker, som ikke deltog i undersøgelsen, og de blev opbevaret i et forseglet ark indtil den statistiske analyse, hvor de blev afsløret.

De dexamethasonbehandlede rotter (positiv kontrol) blev gjort åbne på grund af de fysiske egenskaber ved den anvendte formulering; den var helt forskellig fra de homøopatiske og var derfor let genkendelig. Behandlingen og den mikroskopiske analyse af prøverne blev udført af to uafhængige personer, altid i blinde. Den samlede dosis dexamethason, der blev anvendt til at frembringe antiinflammatoriske virkninger, var 4 mg/kg, i overensstemmelse med de tidligere definerede standarder . Denne fraktionerede protokol var udformet til at reproducere en sædvanlig homøopatisk klinisk tilstand ved akut betændelsesbehandling og blev også anvendt i tidligere undersøgelser udført af vores gruppe . Dexamethason blev valgt som en positiv kontrolgruppe, fordi dets virkningsmekanisme efterligner virkningsmekanismen for helenalin, det vigtigste aktive princip i Arnica montana .

Den kommercielle Arnica montana 6cH blev fremstillet i 5% hydroalkoholisk opløsning af et apotek certificeret af det regulerende brasilianske nationale agentur for sundhedsovervågning (ANVISA), Farmácia Sensitiva, São Paulo. De teknikker, der blev anvendt ved fremstillingen, var i overensstemmelse med Brazilian Homeopathic Pharmacopea, 2. udgave, 1997.

2.4. Dataanalyse

Efter den første plotting af ødemintensiteten opnået i forbehandlingsperioden (fra nul til 30 minutter) blev dataene klassificeret i halvmåneformet rækkefølge ved hjælp af en Excel 2003-software på en sådan måde, at det ville være muligt for hver gruppe at opdele de 10 rotter (50 %), der spontant viste lavere ødemintensitet, og de 10 rotter (50 %), der viste højere ødemintensitet, i 10 grupper. Der blev således dannet to undergrupper på 10 dyr for hver forsøgsgruppe, hvilket karakteriserede to forskellige rottesubpopulationer i henhold til det inflammatoriske kinetiske mønster (tabel 2). Hele forsøgsdesignet er forklaret i et flowdiagram (figur 7).

Da den klassiske kurve for carrageenaninduceret ødem er over op til 6 timer efter inokulation, blev valget af begge tidspunkter (30 og 180 minutter) baseret på dens kendte plateau . Desuden viser tidligere undersøgelser af virkningerne af Arnica 6cH på carrageenaninduceret ødem ingen virkninger mere efter denne periode . Kinetikken for evaluering af den inflammatoriske proces efter injektion af carrageenan er en klassisk eksperimentel model, der blev udviklet i løbet af 70’erne . Det er således et pålideligt kriterium, der skal anvendes i dette tilfælde.

Efter plotning af data (figur 1(a) og 1(b)) blev det let at identificere begge kinetiske mønstre: (a) dyr, der præsenterede mindre intense ødemer i de første 30 minutter af forbehandlingen, havde toppen mellem 30 og 180 minutter (kaldet sent ødem), og (b) dyr, der præsenterede mere intense ødemer i de første 30 minutter, faldt efter denne periode (kaldet tidligt ødem).

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figur 1

Ødem (mm) i forskellige grupper og undergrupper. (a) Ødemets udvikling som funktion af tiden i undergruppen tidligt ødem; (b) ødemets udvikling som funktion af tiden i undergruppen sent ødem; (c) intensiteten af ødemet ved forsøgets afslutning i undergruppen tidligt ødem; (d) intensiteten af ødemet ved forsøgets afslutning i undergruppen sent ødem. ; ANOVA, Tuckey-Krammer, i forhold til kontrol. Værdierne repræsenterer gennemsnit ± standardafvigelse.

Alle resultater blev sammenlignet mellem de seks undergrupper. Denne udvælgelse a posteriori blev foretaget for at kontrollere den rolle, som individuel idiosynkrasi spiller for Arnica-effekten i henhold til similia-princippet, da hastigheden af ødem-remissionen er et af de mest kendte Arnica montana-symptomer, der er beskrevet i materia medica .

2.5. Immunohistokemisk analyse

Alle objektglas blev vasket med 1 : 1 alkohol-æteropløsning i fem minutter og derefter tørret med et blødt ark papir og behandlet med 1 : 10 poly-L-lysin (SIGMA). Derefter blev der overført 5 mikron paraffinindlejrede vævsskiver til deres overflade ved hjælp af et histologisk bad på 40 °C. Derefter blev skiverne afparaffineret gennem to bade i absolut xylol i 2 minutter og to bade i absolut alkohol i 3 minutter. Derefter blev objektglassene vasket i rindende vandhanevand.

For de immunhistokemiske procedurer blev der foretaget et første trin til antigenoptagelse ved hjælp af varmebehandling af prøverne. Objektglassene blev anbragt i et citratbufferbad (SIGMA), pH = 6,0, indeholdende 0,5 % tween 20 (DAKO), og opvarmet i en elektrisk gryde ved 80 °C (PANASONIC) i 20 minutter. Derefter blev objektglassene vasket i PBS, pH = 7,2 (SIGMA), i 6 minutter og tørret med et blødt absorberende papir, og vævsprøven blev afgrænset ved hjælp af en passende pen (Pap-pen, AbCam).

Den endogene peroxidaseaktivitet blev blokeret ved inkubation af vævene i en 3% H2O2-opløsning fortyndet i methanol (ISOFAR) i 15 minutter ved stuetemperatur. Derefter blev de vasket i PBS (SIGMA) i 6 minutter og behandlet med 2,5 % hesteserum (VECTOR) i 20 minutter ved 25 °C for at blokere uspecifikke proteinbindingssteder. Umiddelbart efter dette trin blev vævene behandlet med det primære antistof (jf. fortyndinger og specifikationer i tabel 3) og lod dem stå natten over ved 4 °C i et fugtigt kammer. Alle fortyndinger af primære antistoffer blev fremstillet i 1 % bovin serumalbumin (BSA).

Den næste dag blev snittene vasket i PBS (sigma) i 6 minutter og behandlet med polymer-peroxidase-konjugeret sekundært antistof (IMPRESS UNIVERSAL, VECTOR) ved 25 °C i 30 minutter. Efter en ny vask i PBS (6 minutter) blev de eksponeret for DAB (DAKO) i 3 sekunder, skyllet endnu en gang i vandhanevand, farvet med Harris-hæmatoxylin (01 minut) og monteret.

2.6. Histomorfometri

Til evaluering af mastcelledegranuleringsprocenten blev to hundrede celler pr. objektglas farvet med Toluidinblå-metoden talt ved hjælp af sammenhængende felter, idet der blev skelnet mellem de degranulerede og de ikke-degranulerede celler. For at vurdere lymfekardiameteren blev fem tilfældigt udvalgte felter vurderet ved hjælp af et 200 x objektiv. Der blev taget fotomikrografer af hvert felt (CANNON), og procentdelen af lymfekararealet pr. felt blev bestemt ved hjælp af et digitalt billedanalysesystem (Image Tool 3.0). Diameteren af lymfekar kan betragtes som en god parameter til vurdering af lymfødemabsorptionen i henhold til tidligere observationer . Da protokollen drejede sig om akutte hændelser, blev hypotesen om lymfhangiogenese ikke overvejet.

For anti-CD45RA-, CD3-, CD18-, CD163- og MAC 387-markørerne blev ti mikroskopiske felter, der blev valgt tilfældigt, observeret pr. objektglas ved hjælp af immersionsobjektiv (størrelsesorden 1000 x). De omfattede næsten hele det subkutane vaskulære bindevæv i puden, og antallet af positive celler pr. felt blev registreret. I tilfælde af Anti-MAC 387 blev kun mononukleære positive celler taget i betragtning. De hæmatoxylin-eosin-farvede objektglas blev anvendt til at tælle antallet af PMN-celler pr. felt. I dette tilfælde blev cellerne kun genkendt ud fra morfologiske kriterier. Udtrykket af CD163 er proportionalt med makrofagmodningen, og derfor blev disse resultater udtrykt som forholdet mellem CD163/MAC 387 mononukleært positive celler pr. felt.

For Anti-CD54 blev intensiteten af positivitet på endothelcellernes overflade vurderet ved hjælp af et pointsystem, der varierer fra 1 til 4. Fem tilfældigt udvalgte felter blev vurderet pr. objektglas ved hjælp af immersionsobjektiv (størrelse 1000 x), og scoringerne blev foretaget af to uafhængige observatører på blind måde for at undgå subjektiv fortolkning i analysen. Den endelige score for hvert objektglas var lig med summen af de delvise scores. Kriterierne for pointinddelingen er angivet i tabel 4.

Score Beskrivelse Fotomikrografi (objektiv 10 x) 1 svag og diskontinuerlig markering af membranen, størrelsesorden 1000 x. 2 Regulær men diskontinuerlig membranmarkering, størrelsesorden 1000 x. 3 Stærk, men diskontinuerlig membranmarkering, størrelse 1000 x. 4 Stærk og kontinuerlig membranmarkering, størrelse 1000 x.

Tabel 4

Kriterier for tildeling af point for forskellige mønstre af endothelcellemarkering.

2.7. Statistisk analyse

Bartlett-testen blev først anvendt til at bestemme den gaussiske fordeling af de fleste datapunkter. Derefter blev der udført ANOVA/Tuckey-Krammer eller Kruskall-Wallis/Dunn i overensstemmelse med Bartlett-resultaterne. Evalueringen af mastcelle-degranulering blev i stedet evalueret ved hjælp af test. Værdierne på blev betragtet som signifikante. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af INSTAT 3-softwaren.

I forbindelse med ødemet blev der også udført en yderligere statistisk analyse inden for grupperne, og sammenligningen af ødemets intensitet mellem undergrupperne efter 30 minutter (spontant ødem) afslørede signifikante forskelle (Tuckey-Krammer, ), hvilket validerede det foreslåede forsøgsdesign.

2.8. Bioetiske kriterier

Protokollen blev godkendt af den bioetiske komité for Universidade Paulista (protokol 011/07), i henhold til São Paulos statslov nr. 11.977/05 (dyrebeskyttelseskodeks for São Paulo State, Brasilien). Denne procedure er i overensstemmelse med den europæiske konvention om beskyttelse af hvirveldyr, der anvendes til forsøg og andre videnskabelige formål, og bilaget hertil.

3. Resultater

Det histopatologiske aspekt af de betændte fodpuder viste de klassiske rammer for en typisk tidlig akut inflammation: ødem og celleinfiltrat svarende til 2/3 af PMN-celler og 1/3 mononukleære celler. I betragtning af den statistiske behandling inden for grupperne kunne der imidlertid identificeres forskellige mønstre for udviklingen af den inflammatoriske proces i forhold til tiden (tabel 5 og 6). Der var således behov for at systematisere og klassificere disse mønstre, inden man analyserede virkningerne af Arnica montana 6cH.

I overensstemmelse hermed kunne der kun ses en signifikant antiødematøs virkning af Arnica montana 6cH (ANOVA, ) i den undergruppe af rotter, der præsenterede ødemtoppen mellem 30 og 180 minutter efter injektion af carrageenan i fodpadden (kaldet sen undergruppe) (Figur 1). Den histomorfometriske analyse af objektglas farvet med Toluidinblå viste også, at den sene undergruppe også udviste mindre intens mastcelledegranulering (, ) og en større gennemsnitlig diameter af lymfekar (Kruskal-Wallis, ). I stedet blev der i den tidlige undergruppe (ødemtoppunkt før 30 minutter) kun observeret en diskret, men signifikant stigning i mastcelledegranulering (, ) samt en stigning i scorerne for CD54-ekspression af endothelceller (Kruskal-Wallis, ) (tabel 5 og 6, figur 2 og 5) (tabel 5 og 6, figur 2 og 5).

(a)

(b)

(a)
(b)

Figur 2

Histogram, der viser procentdelen af degranulerede mastceller og lymfeareal (pixels) pr. felt. (a) Undergruppe, der udviklede tidligere ødem; (b) Undergruppe, der udviklede senere ødem. , i forhold til kontrol. **Kruskal-Wallis, i forhold til dexamethason-gruppen.

Ingen forskel mellem grupper og undergrupper blev observeret med hensyn til cellemigration, idet der blev taget hensyn til PMN-celler og alle markører, der blev anvendt i den immunhistokemiske analyse, herunder forholdet mellem CD 163+/MAC 387+-celler (tabel 5 og 6, figur 3, 4 og 5).

(a)

(b)

(a)
(b)

(a)

(b)

(a)
(b)

(a)

(b)

(a)
(b)

(a)
(b)

Tager man alle data sammen, er det muligt at illustrere hovedkonklusionen ved hjælp af en spredningsgraf over ødemets intensitet, hvor de forskellige tendenser blandt grupper og undergrupper kan ses, efter behandling med Arnica montana 6cH (figur 6). Bemærk, at dyr, der er behandlet med Arnica og udviser sent ødem (sen undergruppe), er forskudt i forhold til baseline i forhold til de andre grupper.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figur 6

Spredningsplotning, der viser forskellige tendenser i ødemets tidsudvikling mellem de to undergrupper. De hvide punkter repræsenterer kontrol, de sorte punkter repræsenterer Arnica montana 6cH, og de grå punkter repræsenterer dexamethason. I hver grafisk figur viser -aksen ødemet 30 minutter før carrageenaninjektion og -aksen ødemet ved forsøgets afslutning. LATE = sen ødemundergruppe; EARLY = tidlig ødemundergruppe. Bemærk, at dyr, der præsenterede et sent ødemtoppunkt og blev behandlet med Arnica montana 6cH, er forskudt til baseline i forhold til de andre grupper.

4. Diskussion

Af de homøopatiske lægemidler, der har særlig interesse i inflammationskontrol , er Arnica montana et af de mest undersøgte . Ikke desto mindre er der i den nyere videnskabelige litteratur om homøopati mange undersøgelser, der søger at demonstrere effektiviteten af dens virkning, men kun få værker er afsat til forståelsen af fysiopatologiske ændringer i væv efter udsættelse af dyr for disse lægemidler . Det er ud fra dette synspunkt, at det foreliggende arbejde er bygget op; gennem en detaljeret undersøgelse af det betændte bindevæv, idet der tages hensyn til de undergrupper af celler, der migrerer til det, karrenes adfærd og den tidsafhængige dynamik i denne proces under virkningen af Arnica montana 6cH . Interessant nok er nogle af de observerede virkninger i overensstemmelse med tidligere observerede resultater, såsom åbning af lymfekar og den deraf følgende reduktion af ødemet.

De første resultater, der er opnået her, peger på en interessant kendsgerning: den individuelle analyse af hver undergruppe viser betydningen af tidsmæssighed i virkningen af Arnica montana 6cH; dyr, der præsenterede spontant sent peak af ødem (efter 30 minutter fra den irriterende injektion) var mere følsomme over for Arnica end de dyr, der præsenterede et tidligt peak af ødem (før 30 minutter). I dette tilfælde var ødemet endnu mindre intenst end i kontrol- og dexamethasonbehandlede grupper, og denne kendsgerning var ledsaget af en betydelig reduktion af mastcelledegranulationen og en forøgelse af lymfekardiameteren. Begge fænomener kan bidrage til reduktionen af makroskopisk ødem og adskiller sig fra dexamethasonmønsteret, hvor lymfekararealet reduceres passivt sammen med reduktionen af ødemet, som vist i figur 2. Denne effekt bekræfter de resultater, der tidligere er observeret i .

Carrageenan er et polysaccharid fremstillet af tang Chondrus crispus, der har evnen til at fremkalde lokal inflammation uden systemiske virkninger . Det er klassisk kendt, at prostaglandiner dannes under ødemdannelsen efter subkutan carrageenaninjektion af migrerede neutrofile . Observationen af den antiødemvirkning af Arnica montana 6cH udelukkende hos dyr, der udviste det sene mønster af akut inflammation, peger i retning af, at forskellige kemiske mediatorer deltager i de kontrollerende veje, som det tidligere er påvist i . I denne forstand modulerer histamin og prostaglandin, mediatorer, hvis virkningstop indtræffer mod 15-30 minutter, sandsynligvis denne proces i den sene ødemundergruppe, i stedet for mediatorer med en meget tidlig virkning, såsom bradykininin, hvis top er omkring 10 minutter efter frigivelse .

Experimentelle modeller, der er specielt designet til at påvise betydningen af individuel variation i virkningen af homøopatisk medicin, blev allerede beskrevet før , men aldrig i en inflammationsprotokol. Individualitet betyder specificitet i homøopatisk medicin; i Rocha 2008 , var kun de naturligt hyperaktive rotter ansvarlige for Rhus toxicodendron 200cH behandling, hvad angår deres adfærd i en åben feltanordning. På den anden side observerede Soares 2007, at det kun var hypoaktive rotter, der var ansvarlige for Bryonia alba 200cH. Disse komplementære undersøgelser viser resultater, der er forenelige med de respektive materia medica. Den systematiske sammenligning af begge undersøgelser og andre ses i .

Med hensyn til PMN og mononukleære leukocytsubtypernes cellemigration blev der ikke set nogen forskel mellem grupper og undergrupper, og CD163+/MAC387+-forholdet afslørede heller ikke nogen ændring i dynamikken i makrofagmodningen i det inflammatoriske område. CD 163 er et transmembran-glykoprotein af type I på 175 kD, også kendt som ED2-protein. Dets tilstedeværelse er blevet beskrevet i den modne makrofagoverflade, men også på en mindre intens måde i umodne monocytter og andre mononukleære celler hos mennesker. Udtrykket af ED 2 er forbundet med jernmetabolismen og stiger i de senere faser af inflammation, fordi positive celler spiller en rolle som modulator ved at frigive autokrin IL10 . Tilstedeværelsen af T- og B-lymfocytter i det inflammatoriske område kunne være relateret til en vis modulerende virkning , hvilket er blevet antydet i tidligere undersøgelser om Arnica montana 6cH , men ikke bekræftet heri.

Ekspressionen af adhæsionsmolekyler CD 54 (ICAM-1) var større hos dyr behandlet med Arnica montana 6cH, der præsenterede et tidligt mønster af inflammation og var forbundet med en større procentdel af degranulerede mastceller i det betændte væv, men ikke med en større leukocytmigration. Selv om der ikke kunne gives nogen mekanistisk forklaring på dette trin af undersøgelsen, ser det ud til, at de globale resultater er opdelt i to hovedmønstre: regulering af den vaskulære dynamik, der er tydelig i den sene ødemundergruppe, og regulering af cellebegivenheder, der er tydelig i den tidlige ødemundergruppe, hvilket tyder på en individuel afhængig kvalitativ justering af vaskulære og cellulære betændelsesbegivenheder ved hjælp af Arnica montana 6cH, som det fremgår af figur 6. Disse forskellige variabilitetsmønstre, der svinger i overensstemmelse med det testede biologiske systems tidligere tilstand, er blevet eksperimentelt beskrevet i andre eksperimentelle sammenhænge med forskellige homøopatiske præparater.

Sammenfattende kan de to foreslåede hypoteser fremhæves: (a) der er ingen selektiv modulering af leukocytundergruppers migration ved behandling med Arnica montana 6cH, men kun vaskulære reguleringer, hvad angår lymfatisk absorption, CD54-ekspression og histamindegranulering, og (b) der er en klar interferens af den individuelle kinetiske variation i vaskulære hændelser efter behandling med Arnica montana 6cH.

Interessekonflikter

Der er ingen interessekonflikter i forbindelse med dette arbejde.

Anerkendelser

Forfatterne takker CAPES-PROSUP Program og FAPESP Proc. nr. 2007/59661-5 for den finansielle støtte; Marcia Gutierrez fra Farmacia Sensitiva for at levere lægemidler; Fernanda Ferrari, Paulo Ailton Valdovato og Lika Osugui for teknisk støtte.