Tras una reunión inicial celebrada el 5 de octubre de 1947 en el Labor Stage, situado en el 106 W. 39th Street (antiguo Princess Theatre), en la que se discutieron los objetivos y las normas básicas de la nueva organización, el estudio abrió oficialmente sus puertas al día siguiente en la Union Methodist Episcopal Church, situada en el 229 West 48th Street, que anteriormente albergaba la Actors Kitchen and Lounge (mantenida para ayudar a los actores y a otras personas que no podían permitirse el lujo de comer), y que durante mucho tiempo fue una fuente de alquiler de locales de ensayo para los productores teatrales locales.
Antes de establecerse en su ubicación actual en 1955, el Estudio se trasladó con regularidad durante un periodo de ocho años: En enero de 1948, era un estudio de danza en la calle 59 Este. En abril de ese año, se trasladó al edificio de la CBS en el 1697 de Broadway, cerca de la calle 53, lo que estableció una cierta estabilidad; el Estudio no volvería a trasladarse hasta el verano de 1952. A partir de ese momento, las antiguas salas de ensayo del Theatre Guild, situadas en la última planta del Teatro ANTA, se convirtieron en su hogar, donde permanecerían hasta octubre de 1954, cuando las renovaciones del teatro hicieron que el Estudio tuviera que alquilar un espacio dos veces por semana. Lo hizo en los Estudios Malin, en el 1545 de Broadway, sala 610. Este acuerdo se mantuvo durante toda la temporada teatral de 1954-1955, incluso mientras el Studio adquiría y renovaba su sede actual.
En 1955 se trasladó a su ubicación actual en la antigua West 44th Street United Presbyterian Church, una estructura de estilo griego que se construyó para la Seventh Associate Presbyterian Church en 1858 o 1859. Fue una de las últimas iglesias construidas en ese estilo en la ciudad de Nueva York.